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简 介:
CelRed核酸染料(10000×水溶液)与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。但是CelRed不能被488 nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。
产品特点:
无毒性:CelRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于EB。
灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
稳定性高: 适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。
信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗 ,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
操作方法:
1.胶染法(用法同EB)(推荐方法)
(1)制胶时每 50 mL 琼脂糖凝胶中加入 5 μLCelRed核酸染料(10000×水溶液),并充分混匀。CelRed核酸染料(10000×水溶液)具有出色的热稳定性,可将试剂直接加入高温的凝胶溶液中,无需等待凝胶溶液冷却后再加入。也可采用将CelRed核酸染料(10000×水溶液)试剂预先与含有琼脂糖粉末的电泳缓冲溶液混合,加热制成)。
(2)按照常规方法进行电泳。
注意事项:如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色。
此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
2.泡染法
(1) 按照常规方法进行电泳。
(2) 用H2O将CelRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如将15μL CelRed 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
(3) 将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。
注意事项:
用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。
3× CelRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。
储存:
2-8℃保存。
几种常见核酸染料比较:
名称 | 灵敏性 | 稳定性 | 对DNA迁移的影响 | 安全性 | 适用性 |
CelRed | 高 | 高 | 条带不弯曲,DNA片段不迁移 | (1) 是一种独特的油性大分子,不易挥发升华,不易吸入人体,不能穿透细胞膜进入活体细胞内,安全无毒。 (2) 艾姆斯氏试验结果也表明,CelRed在凝胶染色浓度下完全没有诱变性,因此完全没有致癌性。 | 通过大小片段电泳染色,与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片以及观察装置。标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用,使用普通紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
SYBR Green I | 高 | 低 | 染料浓度较高时,条带容易弯曲,DNA片段迁移的现象明显 | 属于花菁染料,能穿透细胞膜进入活体细胞内,但容易生物降解,不会在体内残留,安全无毒。
| 100bp以上电泳染色,适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
EB | 低 | 高 | 条带不弯曲,DNA片段不迁移 | (1) 属于花菁染料,易挥发升华,易吸入人体,不易生物降解,在体内长期残留。 (2) 艾姆斯氏试验结果也表明,EB容易引起有机突变,是一种强诱变剂,具有高致癌性。 | 100bp以上电泳染色,背景荧光信号高;使用普通紫外凝胶透射仪观察。 |
Goldview | 低 | 高 | 条带不弯曲,DNA片段不迁移 | (1) 主要成分是吖啶橙,是一种焦煤油提取物,具有高毒,致癌,高诱变性。 (2) 易挥发升华,易吸入人体,能穿透细胞膜进入活体细胞内,不易生物降解,在体内长期残留。 | 100bp以上电泳染色,背景荧光信号高;适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
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