Supersmart Z6 热启动超保真PCR预混液 (5×,with Dye) (ZS-M12004)

简介：

对于测序、SNP检测、蛋白表达和基因功能研究等应用而言，高保真扩增是很关键的。Z6高保真 DNA 聚合酶来源于高保真KOD和Z5 DNA 聚合酶，具有较强的3’-5’外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低。经基因工程改造后，使其具有60倍于Taq DNA聚合酶的保真能力，除此外其还具有5-8kb/min的延伸速度。扩增能力强、扩增成功率高、扩增产量高、保真性高。可用于载体构建、突变修复、基因合成、DNA测序等高保真要求较高的试验。该酶的扩增产物为平端产物，不含“A”尾，可直接克隆于Supersmart^TM ZERO-Blunt零背景平末端克隆载体（ZS-M16002），如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品中的DNA聚合酶具有热启动功能，可有效的控制低温情况下的非特异扩增和酶活损耗，进而保证了PCR扩增的特异性和稳定性。预混液可对多种模板进行超强扩增，以λDNA为模板可轻松扩增15kb基因片段，以人基因组为模板可轻松扩增8kb的基因片段。

5XHotStart HiFi Z6 PCR Mix 是经优化的即用型PCR预混物，含有经抗体封闭的热启动Z6超保真 DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂和稳定剂，使用时只需加入模板、引物和灭菌水即可进行PCR扩增，大大简化了操作过程、减少PCR扩增操作时间、提高了效率、避免因多步操作带来的污染、、减少了PCR 操作过程中的人为误差。具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。该制品中已经含有溴酚蓝染料，PCR扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶，无需再加入DNA Loading Buffer，如用于克隆时，需纯化去掉染料。本产品中还整合了PCR 增强剂组分，可以提高Supersmart^TM Z6 热启动超保真PCR预混液对PCR反应抑制剂的耐受能力和对不同GC含量模板的适应能力，因此可以在扩增高级结构复杂的产物和PCR抑制剂含量较高的PCR体系时使用。

使用方法：

1. 室温融解 5XHotStart HiFi Z6 PCR Mix(with Dye)。

2. 按下表配制反应体系并混合均匀：

*模板DNA用量参数(50 μl 反应体系)

模板DNA              25-250 ng Genomic DNA

(目的片段≤15 kb)      1-10 ng Plasmid DNA

1-2 μl cDNA from RT reaction

3. PCR扩增循环参数

（1）在以质粒为模板的情况下，可按照6kb/min设置延伸时间，在以基因组 DNA和cDNA为模板条件下，可按照 2kb/min设置延伸时间。

（2）以Z6 PCR Mix进行PCR反应时引物长度通常在18~23bp为宜，GC含量40~60%为最佳。GC 含量超过 65%以上的模板建议使用 5XQ Solution（Cat No.：ZS-M-1058）。

（3）由于Z6 DNA聚合酶具有较强的引物模板结合能力，通常情况下 TM 值较 Taq DNA 聚合酶高 3~5°C。因此，退火温度可提高 3~5°C。

4.琼脂糖凝胶电泳：直接取5 μl扩增产物进行电泳检测。 

   Z6-500bp    Z5-500bp    Z6-1000bp   Z5-1000bp  M  Z6-2000bp   Z5-2000bp   Z6-5000bp   Z5-5000bp

Fig 1.以ITCH质粒（500bp，1000bp，2000bp）和λ基因组DNA（5000bp）为模板，应用Supersmart^TM Z5 HotStart HiFi PCR Master Mix和 Supersmart^TM Z6 HotStart HiFi PCR Master Mix，分别扩增500bp，1000bp，2000bp、5000bp的片段，每个片段3个复孔，1%琼脂糖电泳，M为DL2000 Marker。

储存：

长期储存置于-20°C以下，可保存3年；短期使用置于4°C（12个月）保存。 

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批号 BA08002 -001