简介:
本品是用于普通 PCR 扩增的 5x 预混体系,含有高纯度的Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂和稳定剂,使用时只需加入模板、引物和水,使其工作浓度为 1×,即可进行反应,大大简化了操作过程、提高了效率、整个反应体系非常稳定、减少了PCR操作过程中的人为误差、节约操作时间、降低污染几率,具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。Taq DNA Polymerase其基因来源于Thermusaquaticus polymerase,具有扩增效率高、错配率低的优良性能,由于Taq DNA聚合酶在变性步骤中(约94℃)不失活,可直接进入第二轮循环,因此不必每轮循环时重新加入新酶,这使得Taq DNA聚合酶成为PCR反应中的独特用酶。该制品可应用于常规PCR扩增和大规模基因检测。该制品中已经含有溴酚蓝染料,PCR扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶,无需再加入DNA Loading Buffer。该制品以人基因组DNA为模板可很好的扩增5kb的DNA片段。由于Taq酶没有3’至5’的外切酶活性,因此在DNA聚合过程中相当于核苷酸转移酶的作用,最终会导致PCR产物的3’末端会产生3’-dA overhangs,即产生带一个A的3’粘端。
用途:
基因检测、定点突变分析和T-A克隆。
使用方法:
1. 室温融解 5×Effcient Taq PCR Mix (with Dye)。
2. 按下表配制反应体系并混合均匀:
5×Effcient Taq PCR Master Mix | 10 μl |
上游引物(10 μM) | 2 μl |
下游引物(10 μM) | 2 μl |
模板 DNA | 1-500 ng |
ddH2O | up to 50 μl |
*模板 DNA 用量参数(50 μl 反应体系)
模板 DNA (目的片段≤5 kb) | 25-500 ng Genomic DNA |
2-20 ng Plasmid DNA |
1-2 μl cDNA from RT reaction |
3. PCR 扩增循环参数
循环数 | 温度 | 时间 |
1st Cycle | 95°C | 2min |
25-35 Cycles | 95°C | 10s |
50~60°C | 20s |
72°C | 2kb/1min |
Last Cycle | 72°C | 5min |
具体程序根据实际扩增情况而定。
4. 电泳:1% 琼脂糖凝胶电泳,上样 5 μl 进行电泳检测。
储存:
长期储存置于-20°C 以下,可保存3年;短期使用置于4°C(12 个月)保存。

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