简介:
5×HiFi Blood Direct PCR Mix是经优化的既用型PCR预混物,含有专用于血液扩增DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂和稳定剂,使用时只需加入模板、引物和灭菌水即可进行PCR 扩增。专用血液扩增用DNA聚合酶可耐受高达10%的全血量,配合精心优化的Buffer 体系,具有超强抗PCR 抑制物能力,可直接以血液/ 培养细胞为模板进行PCR 扩增,操作简便,因此该制品可直接使用全血(或粗提取物)作为模板进行 PCR 扩增,无需复杂的DNA提取步骤,可有效扩增高GC含量的模板和引物。5×HiFi Blood Direct PCR Mix扩增产物不含“A”尾巴,为高保真扩增 (达普通Taq酶的60 倍)。是一种经过基因工程改造的非常高效的并且具有高保真性的适用于人、小鼠、猪、牛等哺乳动物和禽类等物种的培养细胞,新鲜及4℃储存冷冻全血、抗凝血(EDTA、柠檬盐、肝素)、液化的血凝块。
用途:
基因检测、SNP分析。
使用方法:
1. 按下表配制反应体系并混合均匀:
5×HiFi Blood Direct PCR Mix | 10 μl |
上游引物(10 μM) | 2 μl |
下游引物(10 μM) | 2 μl |
全血或粗提物 | 0.1~2.5 μl |
ddH2O | up to 50 μl |
2. PCR 扩增循环参数
循环数 | 温度 | 时间 |
1st Cycle | 95°C | 5 min |
30-40 Cycles | 95°C | 10 s |
*退火温度 | 20 s |
72°C | 2 kb/min |
Last Cycle | 72°C | 5 min |
*退火温度由引物确定。
3. 电泳:1%琼脂糖凝胶电泳上样5 μl,电泳结束在紫外灯下检测条带。
Fig 1.以9只小鼠全血基因组为模板扩增KLF4和GAPDH。胶孔上面9道为9只小鼠的KLF4 genotyping,下面9道为GAPDH内参(258bp)。
储存:
储存置于-20°C以下,可保存2年。
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