Supersmart Z5热启动超保真PCR 预混液 (5×,with Dye) (ZS-M12003)

简介：

对于测序、SNP检测、蛋白表达和基因功能研究等应用而言，高保真扩增是很关键的。Z5超保真DNA聚合酶来源于高保真Pfu DNA聚合酶，具有很强的3’-5’校正活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率极大降低。经基因工程改造后，使具有100倍于Taq DNA聚合酶的保真能力，除此外其还具有6 kb/min 的延伸速度。扩增能力强，扩增速度快，具有高保真性，高特异性。可用于载体构建、突变修复、基因合成、DNA测序等高保真要求较高的试验。该酶的扩增产物为平端产物，不含“A”尾，可直接克隆于Supersmart^TM ZERO-Blunt零背景平末端克隆载体（ZS-M16002），如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品中的DNA聚合酶具有热启动功能，可有效的控制低温情况下的非特异扩增和酶活损耗，进而保证了PCR扩增的特异性和稳定性。预混液可对多种模板进行超强扩增，以λDNA为模板可轻松扩增15kb基因片段，以人基因组为模板可轻松扩增8kb的基因片段。

5× HotStart HiFi Z5 PCR Mix 是经优化的即用型 PCR预混物，含有经抗体封闭的热启动Z5超保真 DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、PCR 增强剂和稳定剂，使用时只需加入模板、引物和灭菌水即可进行 PCR 扩增，大大简化了操作过程、 减少PCR扩增操作时间、提高了效率、避免因多步操作带来的污染、减少了PCR操作过程中的人为误差。具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。该制品中已经含有溴酚蓝染料，PCR扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶，无需再加入DNA Loading Buffer，如用于克隆时，需纯化去掉染料。本产品中还整合了PCR 增强剂组分，可以提高Supersmart^TM Z5热启动超保真PCR预混液对PCR反应抑制剂的耐受能力和对不同GC含量模板的适应能力，因此可以在扩增高级结构复杂的产物和PCR抑制剂含量较高的PCR体系时使用。

使用方法：

1. 室温融解 5XHotStart HiFi Z5 PCR Mix (with Dye)。

2. 按下表配制反应体系并混合均匀：

*模板DNA用量参数（50μl反应体系)

模板DNA                   25-250 ng Genomic DNA

(目的片段≤15 kb)      1-10 ng Plasmid DNA

                                  1-2 μl cDNA from RT reaction

3. PCR 扩增循环参数

（1） 在以质粒为模板的情况下，可按照5 kb/min 设置延伸时间，在以基因组DNA和cDNA为模板条件下，可按照 2 kb/min 设置延伸时间。

（2） 以Z5 PCR Mix 进行 PCR 反应时引物长度通常在18~23bp为宜，GC含量 40~60%为最佳。GC含量超过65%以上的模板建议使用5XQ Solution（Cat No.ZS-M-1058）。

（3） 由于Z5 DNA 聚合酶具有较强的引物模板结合能力，通常情况下TM值较 Taq DNA 聚合酶高 3~5°C。因此，退火温度可提高 3~5°C。

4.琼脂糖凝胶电泳：直接取5μl扩增产物进行电泳检测。 

  Z6-500bp    Z5-500bp    Z6-1000bp   Z5-1000bp  M  Z6-2000bp   Z5-2000bp   Z6-5000bp   Z5-5000bp 

Fig 1.以ITCH质粒（500bp，1000bp，2000bp）和λ基因组DNA（5000bp）为模板，应用Supersmart^TM Z5 HotStart HiFi PCR Master Mix和 Supersmart^TM Z6 HotStart HiFi PCR Master Mix，分别扩增500bp，1000bp，2000bp、5000bp的片段，每个片段3个复孔，1%琼脂糖电泳，M为DL2000 Marker。

储存：

长期储存置于-20°C以下，可保存3年；短期使用置于 4°C（12个月）保存。 

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批号 BA08001 -001

批号 BA08001 -002