简 介:
ZAPA High Fidelity DNA 聚合酶是一种新型的高保真酶体系,并加入了增强的延伸结构,使其具有280 倍于普通Taq酶的超保真性能,与其他高保真酶相比具有行业领先性。该酶具有 6kb/min 以上的扩增速度,扩增基因组或cDNA可达10kb,扩增质粒或噬菌体DNA可达20kb。ZAPA High Fidelity DNA 聚合酶具有长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量。该酶经化学修饰,采用专有的热启动技术确保 50℃以下 100%无活性,因此可在室温建立反应体系。热启动配方中,酶是结合在一个特定载体上,使其在第一部变性之前一直保持灭活状态,这样就消除了反应设定和启动过程中非特异性启动导致的产物增加,提高 PCR 扩增的特异性、PCR 产物的产量、 准确性和精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液,可在宽范围。中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
当执行高保真PCR时,在产生足够的产物用于克隆的前提下,减少循环数是很重要的。额外的循环数增加了产量却降低了保真性:反应早期少量的错配都是固定的,此后在每个连续循环中都得到放大,在随后的周期,任何额外的错误都将导致突变扩增的比例增加。该 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、强 3’-5’的外切酶活性,产物为平末端,因此产物可用于平端克隆。该制品中已经含有溴酚蓝染料,PCR 扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶,无需再加入 DNA Loading Buffer。
特点和用途:
(1)超保真扩增:其具有280 倍于普通Taq酶的超保真性能,是载体构建、点突变、NGS 模板扩增、基因合成的最佳用酶。
(2)长片段扩增能力:使用该酶可轻松扩增 8kb 的基因组片段,20kb 的λ DNA,8kb 的 cDNA。
(3) 快速 PCR:该酶具有 6kb/min 以上的扩增速度,可显著的缩短 PCR 的扩增时间,在常规测试条件下,10s 的延伸时间可完成 1kb 的基因组 DNA 扩增。
(4)高 PCR 成功率:与其它类型的 PCR 扩增试剂对比中,2×ZAPA High Fidelity PCR Mix 表现出最佳的 PCR 扩增成功率。
使用方法:
1. 按下表配制反应体系并混合均匀:
2×KAPA High Fidelity PCR Mix | 1.25 μl |
上游引物(10 μM) | 1 μl |
下游引物(10 μM) | 1 μl |
模板 DNA | 1-250 ng |
ddH2O | up to 25 μl |
*模板DNA用量参数(50μl反应体系)
模板DNA 5-250 ng Genomic DNA
(目的片段≤20 kb) 0.1-10 ng Plasmid DNA
1-2 μl cDNA from RT reaction
2. PCR 扩增循环参数
循环数 | 温度 | 时间 |
1st Cycle | 95°C | 1 min |
25-40 Cycles | 95°C | 20 s |
50~60°C | 20 s |
72°C | 6 kb/min |
Last Cycle | 72°C | 2 min |
具体程序根据实际扩增情况而定。
3. 电泳:1% 琼脂糖凝胶电泳,上样 5 μl,电泳结束在紫外灯下检测条带。
4. 注意事项:(1) 当模板 GC 含量>70%时,请添加 SupersmartTM 5×高GC含量模板、长片段辅助buffer(Cat. No.: ZS-M12012)。(2) 当扩增片段<1kb 时, 延伸时间可直接使用 15s,当扩增片段<3kb 时,延伸时间可直接使用 30s,当扩增片段>3kb 时,请按照 2kb/min 的延伸时间进行设置。在按照 2kb/min 设置延伸时间的条件下能获得最高的产量。
M ZAPA超保真 ZAPA全能 Z5超保真 Z6超保真
菌液A 菌液B 菌液A 菌液B 菌液A 菌液B 菌液A 菌液B
Fig 1.以细菌基因组DNA为模板,应用SupersmartTM 2×ZAPA High Fidelity PCR Mix(with dye)、SupersmartTM 2×ZAPA3G Universal PCR Mix (with dye)、
SupersmartTM Z5 HotStart HiFi PCR Master Mix和 SupersmartTM Z6 HotStart HiFi PCR Master Mix,分别扩增16S片段(1300bp、200bp),每个片段2个复孔,1%琼脂糖电泳,M为DM2000 Marker。
储存:
长期储存置于-20°C以下,可保存2年;短期使用置于 4°C,可保存3个月。
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