简介:
该提取试剂盒采用基于异硫氰酸胍/苯酚法的优化的独特的裂解液,RNA与硅胶膜离心柱特异地结合,可快速高效从新鲜抗凝全血样本中纯化出高纯度的总 RNA,快速有效去除细胞中基因组DNA和蛋白质,使获得的RNA 纯度高,稳定性好。总RNA包括大于200个核苷酸的RNA(也常被称为总RNA)和小于200个核苷酸的小RNA(small RNA)。本试剂盒具有高效、快速、方便的特点,总时长仅需6 min左右。是目前国际上操作步骤最少、用时最短的血液RNA提取试剂盒之一。所获得的RNA可直接用于反转录、基因克隆、定量检测、体外翻译、RNase protection assay, 也可用于基因表达芯片分析(microarray)、文库构建、杂交等多种分子生物学实验。
注意事项:
(1) 本试剂盒中的Washing Buffer 中已经加乙醇,无需单独添加。
(2) Solution R1和Solution R2均具有腐蚀性,注意防护。
操作方法:
(1)白细胞分离
① 取一支15ml离心管,加入与样本量相等的Buffer LS(不足3ml加入3ml Buffer LS)。用吸管小心吸取血液样本加于Buffer LS的液面上,400g,30-40min。(注:根据血液样本量确定离心条件,血液样本量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到最佳分离效果,但最大离心力最好不超过1200g)。
② 离心后,此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层(含血小板)。 第二层为环状乳白色淋巴细胞(单核/单个核细胞层)。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层(含大量中性粒细胞)。
③ 取第二层白色淋巴细胞环层,加入三倍体积的生理盐水或PBS混匀,60-250g,离心10min,弃去上清。
④ 加5-8ml生理盐水或PBS混匀,60-250g离心10min,弃去上清。
⑤ 重复上一步,用30~100μl水或PBS重悬细胞沉淀。
(2)裂解/上柱(1.5ml EP 管中处理)
加入120μl Solution R1漩涡混匀30s,加入500μl Solution R2上下颠倒混合均匀,倒入吸附柱中。13000rpm 离心30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
(3)洗涤和洗脱
向吸附柱中加入500μl RNA Washing Buffer,13000rpm 离心15s。重复此步骤一次。将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心1min,将残留的乙醇彻底甩干。 将吸附柱芯放入到 1.5 mL Nuclease Free 收集管中,向吸附柱芯中加入20~50μl Nuclease Free H2O,室温放置1min,13,000rpm 离心1min,洗脱液即为提取的RNA,冷冻保存。
Fig 1.使用SuperbrilliantTM 6 min Fresh Blood RNA Extraction Kit提取新鲜全血RNA,白细胞分离示意图。
Fig 2.使用SuperbrilliantTM 6 min Fresh Blood RNA Extraction Kit提取新鲜全血RNA,中实基因6分钟耐热首链cDNA合成试剂盒反转的cDNA为模板,5×快速SYBR Green qPCR预混液进行荧光定量PCR检测Actin基因。
储存:
Buffer LS于4℃保存,其他组分室温避光保存,试剂盒保质期2年。
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