简介:
该提取试剂盒采用基于异硫氰酸胍/苯酚法的优化的独特的裂解液,RNA与硅胶膜离心柱特异地结合,可快速高效从组织、细胞、病毒液样本中纯化出高纯度的总 RNA,快速有效特异性去除细胞中基因组DNA和蛋白质,使获得的RNA 纯度高,稳定性好。总RNA包括大于200个核苷酸的RNA(也常被称为总RNA)和小于200个核苷酸的小RNA(small RNA)。本试剂盒具有高效、快速、方便的特点,总时长仅需6 min左右。是目前国际上操作步骤最少、用时最短的RNA提取试剂盒之一。
特点:
l用时最短:极强的裂解能力使得样品瞬间裂解,组织细胞样品可在6min内完成总RNA的提取。
l超高纯度:该试剂盒采用柱式纯化,获取的RNA A260/A280为1.9~2.1,A260/A230为1.9~2.1。
l高质量RNA:使用该试剂盒获取的RNA完整性良好。
l使用安全:无需酚/氯仿抽提,减少了有毒有害物质。
l操作极简化:只需将样品与 Solution R1和Solution R2混合,经一步挂柱和洗脱即可获得高质量总RNA。
用途:
该提取试剂盒所获得的RNA可直接用于反转录、基因克隆、定量检测、体外翻译、RNase protection assay, 也可用于基因表达芯片分析(microarray)、文库构建、杂交等多种分子生物学实验。
操作方法:
(1)裂解/上柱(1.5ml EP 管中处理)
细胞(<107):贴壁细胞胰酶消化完毕后,离心收集细胞沉淀,悬浮细胞直接离心收集细胞沉淀,用20~30μl 水或PBS重悬细胞沉淀(务必重悬充分)。加入 120μl Solution R1漩涡混匀30s(有未溶解的细胞团块要吹打,助溶解),加入 500 μl Solution R2上下颠倒混合均匀,倒入吸附柱中。13000 rpm 离心 30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
组织(<10mg):组织样本可采取以下两种方式进行:a)取不超过10 mg的组织样本,用液氮研磨粉碎组织样本,将研磨粉碎的样品加入到150 μl Solution R1中,漩涡混合均匀1 min(有块状组织未溶解的,要使用枪头吹打,助消化)。13000rpm 离心15s,吸取 120 μl 上清到新的EP管中,加入500 μl Solution R2上下颠倒混合均匀,倒入吸附柱中。13000rpm 离心30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。b)取不超过30 mg的组织样本,加入到350μl Solution R1中(1.5ml EP 管),并加入几粒钢珠,置于组织研磨仪中,研磨1~2min。研磨完毕后 13000rpm 离心15s,吸取120 μl~200 μl 上清到新的EP管中(不要吸入未裂解的组织块),加入500μl Solution R2上下颠倒混合均匀,倒入吸附柱中。13000rpm离心30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
病毒液/体液:吸取150μl病毒液/体液样品到加入到120 μl Solution R1中,漩涡混合均匀30s。直接加入500 μl Solution R2中,漩涡混合均匀15s。倒入吸附柱中,13000rpm 离心30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
细菌:收集菌体后,用 20~30 μl 水重悬菌体(务必重悬充分), 加入120 μl Solution R1漩涡混匀 30s,加入 500 μl Solution R2上下颠 倒混合均匀,倒入吸附柱中。13000 rpm离心30 s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
(2)洗涤和洗脱
向吸附柱中加入500μl RNA Washing Buffer,13000rpm 离心15s。重复此步骤一次。将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心1min,将残留的乙醇彻底甩干。 将吸附柱芯放入到 2mL Nuclease Free 收集管中,向吸附柱芯中加入20~50μl Nuclease Free H2O,室温放置1min,13,000rpm 离心1min,洗脱液即为提取的RNA,冷冻保存。
Fig 1.使用SuperbrilliantTM 6 min High-quality RNA Extraction Kit提取的小鼠脾细胞RNA
注意事项:
(1) 本试剂盒中的Washing Buffer 中已经加乙醇,无需单独添加。
(2) Solution R1和Solution R2均具有腐蚀性,注意防护。
储存:
组分全部室温避光保存,试剂盒保质期2年。
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