简介：
ZAPA3G DNA 聚合酶具有高度的杂质耐受性、长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量，这些特点使得ZAPA3G 系列产品可用于粗制样品的直接扩增，无需核酸纯化步骤。该酶经化学修饰，采用专有的热启动技术确保 50℃以下 100%无活性，因此可在室温建立反应体系。热启动配方中，酶是结合在一个特定载体上，使其在第一部变性之前一直保持灭活状态，只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力，从而启动 PCR 扩增，这样就消除了反应设定和启动过程中非特异性启动导致的产物增加，提高 PCR 扩增的特异性、PCR 产物的产量、 准确性和精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围。中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
2×ZAPA3G Multiplex Probe qPCR Mix 将热启动 ZAPA3G DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试剂预混 在一起，是一种 2×浓度的单组分预混试剂。该制品不含有 ROX 校正染料，适用于各种荧光标记探针，并且适用于各种定量 PCR 机型。优化的反应缓冲液，使得该制品不仅可用于单重的探针法定量 PCR，还允许进行多重定量 PCR （MultiPlex qPCR）检测，该制品可进行 4 重以上的定量 PCR 检测。
ZAPA3G DNA 聚合酶对抑制物耐受性：
SDS | 0.01% | Serum | 2% |
EtOH | 5% | Plasma Citrate | 2% |
Heparin | 0.1IU/ml | Gua SCN | 0.25% |
Hematin | 30uM | Trizol | 0.5% |
使用方法
1. 按下表配制反应体系并混合均匀：
2×ZAPA3G Multiplex Probe qPCR Mix | 10 μl |
Primer F1 (20 μM) | 0.1-0.4 μl |
Primer R1 (20 μM) | 0.1-0.4 μl |
Probe1 (20 μM) | 0.1-0.4 μl |
其它引物和探针 | X |
模板 DNA | 0.5~2 μl |
ddH2O | up to 20 μl |
关于引物和探针的使用说明：
（1）在进行单重 qPCR 检测时，通常引物和探针用量在 0.2 μl（0.2 μM）时一般具有较高的效果。
（2）在进行多重定量 PCR 时，通常首先进行单重检测，通过单重检测结果来评估引物和探针的效率、特异性等情况后，再进行引物、探针组合进行多重检测。
2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下：
循环数 | 温度 | 时间 |
热启动 | 95°C | 5 min |
40 Cycles | 95°C | 5 s 变性 |
60°C | 30 s 收集信号，退火/延伸 |
注意：退火延伸温度可在 55-65℃调整
3. 在多数情况下，采用两步法程序可获得理想的扩增效果，在无法达到预期理想效果的情况下，也可采用三步法 PCR程序，程序如下：
循环数 | 温度 | 时间 |
热启动 | 95°C | 5 min |
40 Cycles | 95°C | 5 s 变性 |
55°C | 10 s 退火 |
72°C | 30 s 延伸 |
4. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线和标准曲线。
储存：
长期储存置于-20°C以下，可保存3年；短期使用置于 4°C，可保存3个月。
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400-996-3155
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