Supersmart 第三代ZAPA SYBR Green qPCR预混液(2×) (ZS-M13002)

简 介：

本产品是采用 SYBR Green 嵌合荧光法进行 Real-Time PCR 的专用试剂，其中第三代ZAPA SYBR Green qPCR预混液(2×)是将化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试剂预混的 2×浓度的单组分预混试剂。进行实验时，PCR 反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、模板、水即可。

产品中的 DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶， 同时该聚合酶具有最高的耐受杂质能力，其对乙醇、胍盐、肝素、血清、植物多酚等具有极高的耐受性，因此适用于粗制核酸样本的直接 PCR 扩增反应，对于含有前述杂质的动植物组织、细胞、细菌、病毒、全血、血清、血浆、体液粗样本可直接进行 PCR 检测，省去了核酸提取步骤。该酶经化学修饰，采用专有的热启动技术确保 50℃以下 100% 无活性，因此可在室温建立反应体系，只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力，从而启动 PCR 扩增，提高 PCR 扩增的特异性。能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。随着热循环的不断进行，剩余的酶活会源源不断地释放出来，这就使得此酶克服了常规 Taq 酶容易出现平台期的弊端，其扩增效率大大提高，提高特异性 PCR 产物的产量、 准确性和精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围。中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。

该制品配有单独的 ROX 内参染料，使得该试剂可应用于所有 RealTime PCR机型，包括：ABI 7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)；LightCycler (Roche Diagnostics)； Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad&MJ)；

Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。

操作方法:

1. 根据机型选择步骤 A或B

A: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time PCR仪，包括：ABI PRISM7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)等。

按照如下组分配制20 μl PCR反应体系：

B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time PCR 仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)；MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Eco qPCR（Illumina）；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。

按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系：

2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下：

Stage 1: 95℃     5 min*

Stage 2: 95℃    10s

60℃     20s   40 cycles    (ABI 7500普通模式为 60℃ 30s)

Stage 3: 溶解曲线（该步骤使用PCR仪器默认程序即可）

注意：由于该酶为化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶，必须于 95℃加热5min 才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短时间。

3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。

储存：

(1) 长期保存，请避光置于-20℃可保存3年，或-80℃长期保存。

(2) 经常使用，融化后可置于 4℃，可保存 1年。

(3) 长期-20℃保存可能会出现沉淀，室温融化后混合均匀，不影响试剂性能。

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批号 BJ12004 -001