Supersmart 高效耐热首链cDNA合成试剂盒（含HL dsDNase） (ZS-M14002)

简介：

本试剂盒采用稳定高效的反转录预混体系 5× RT Master mix进行RNA的反转录反应，使用时只需加入模板、引物和 RNase Free H₂O即可，大大简化了操作过程、提高了效率、减少了操作过程中的人为误差和RNA的降解可能。Master mix中添加了HL dsDNase（热敏双链特异性核酸酶），该双链特异性核酸酶可在反转录的过程中，直接高效降解去除RNA中残留的基因组DNA污染(可去除100 ng基因组DNA)，从而在定量PCR的检测中无需考虑基因组污染的干扰，设计的定量PCR引物也无需进行横跨外显子。该试剂盒尤其适用于定量PCR检测。

该预混体系包含点突变致RNase活性缺失的MuLV Reverse Transcriptase反转录酶、dNTP、反应Buffer、HL dsDNase和RNase Inhibitor。该试剂盒采用的反转录酶去除了RNase H活性，从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受 55℃高温反应，从而进一步提高了其反转录效率和反应速率。相比于低温条件下反转录反应，采用高温反转录可显著打开RNA二级结构，从而提高复杂 RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量，从而提高后续检测的灵敏度。高温反转录对于高GC含量RNA的反转录，能有效减少二级结构，提升反转录效率。在通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板和反转录长片段cDNA等方面的表现突出。精心优化的反应 Buffer使逆转录酶应用范围更广，对后续的PCR以及定量PCR实验兼容性高。合成的第一链cDNA 可广泛用于2nd Strand的合成、杂交、PCR扩增、Real-Time PCR 反应等,以及cDNA文库的构建，尤其是反转录所得目的基因的克隆等。还可以通过反转录用于DNA探针的荧光、生物素、地高辛或同位素标记等。

用途：

（1）该制品可有效反转录 mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA等

（2）该制品不可反转录 microRNA、病毒 DNA/RNA 样品

使用方法：

1. 按以下组分配制反转录反应液

*注：反转录引物可根据需要改用特异性引物。

2.根据实际情况反转录可选择快速程序或标准程序

快速程序

37°C    15~30min

85°C    5min

标准程序

25°C    10min

55°C    30~60min

85°C    5min

注：通常在定量 PCR 实验中使用快速程序进行反转录（反转录效率>80%），在进行高GC含量、含复杂二级结构、长片段的模板转录时采用标准程序（反转录效率>100%）。

            中实同创                                                                    Q公司

β-actin

mcp

Fig 1. Supersmart^TM TRIZOL裂解液提取的小鼠心肌细胞HL-1的RNA，中实基因该反转录试剂盒与其他品牌反转录试剂盒比较，使用2×Hi SYBR Green qPCR Mix对基因β-actin和MCP进行qPCR检测Actin和MCP基因。

注意事项：

如 5× RT Master mix (with HL dsDNase)出现沉淀属正常现象，可用手捂化，混合均匀后使用不影响实验结果。

储存：

请置于-20°C，可保存 3 年；避免反复冻融。

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批号 BC13008 -001