简介:
本体系是用于染料法(SYBR Green I)实时荧光定量的预混体系。产品含有优化浓度的HotStart Taq DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和稳定剂等成分,主要用于cDNA和基因组DNA等的特异性超高灵敏度定量检测。SYBR Green I在游离状态下的荧光比较微弱,一旦与双链DNA结合后,其荧光会大大增强。通过检测荧光强弱就可以定量检测PCR过程中扩增产生的双链DNA的数量。
本SYBR Green qPCR Mix将抗体封闭的热启动Taq DNA 聚合酶、反应Buffer、dNTP、SYBR Green染料等试剂预混在一起,是一种 5× 浓度的单组分预混试剂,进行实验时,PCR 反应液的配制十分方便简单,只需加入引物、模板、水即可。
制品中的 DNA 聚合酶为抗体封闭的 Hot Start Taq DNA聚合酶,该酶在50度以下无活性,只有 95 度条件下加热后才能完全恢复酶的活力。该试剂盒独特的反应缓冲液,可在宽范围中检测更灵敏,信号更强,显著提高了PCR的扩增效率。具有高扩增效率、高扩增特异性和宽广的可信范围的特点,对于不同来源、不同丰度的目的基因都具有良好的适应性和准确的定量结果。本产品具有广泛的样本普适性,对具有复杂高级结构的模板、PCR抑制剂残留较多的模板以及长片段扩增等具有非常好的适用性。在不影响PCR效果的前提下更快获得结果,节约科研时间和能源。该制品含有 ROX 校正染料,适合于需要 ROX 校正和无需 ROX 校正的各种定量PCR 机型。
操作方法:
1. 按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系:
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| 终浓度 |
5×Fast SYBR Green qPCR Mix | 4 μl | 1× |
PCR Forward Primer(10 μM) | 0.2 μl | 0.1 μM |
PCR Reverse Primer(10 μM) | 0.2 μl | 0.1 μM |
DNA 模板 | 0.5~2 μl |
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ddH2O | Up to 20 μl |
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2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法,程序如下:
Stage 1: 95℃ 30s
Stage 2: 95℃ 5~10s
60℃ 20s 40 cycles (ABI 7500为 60℃ 30s)
Stage 3: Dissociation analysis
3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。
储存:
(1) 长期保存,请避光置于-20℃或-80℃可保存3年。
(2) 经常使用,融化后可置于 4℃,可保存 1年。
β-actin mcp
Fig 1. SupersmartTM TRI RNA裂解液提取的小鼠心肌细胞HL-1的RNA,中实基因第四代高效耐热MuLV反转录酶反转的cDNA为模板,不同品牌qPCR Mix进行荧光定量PCR检测Actin和MCP基因。
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