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简介：
SupersmartTM TRI RNA裂解液是一种可提取动植物样品中RNA的制品。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。样品在TRI RNA Reagent中能够充分被裂解，在样品匀浆或裂解过程中，它可保持 RNA 的完整性，同时裂解细胞，溶解细胞内含物，加入氯仿后，溶液分为无色水相和粉红色有机相，RNA在水相，用异丙醇可沉淀回收RNA，有机相用异丙醇可回收蛋白质。该试剂可用于小量样品（50-100 mg 组织、1x106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）。TRI RNA Reagent具有很强的广谱性，可以适用于各种样品的总RNA提取，对人、动物、植物组织、病毒、细菌、真菌等样本均适用，可同时处理大量不同样品，提取过程方便快速，整个提取过程在一小时内即可完成提取得率高、纯度高、完整性好的总RNA。
用途：
该试剂分离的总RNA蛋白质和DNA污染极低，可用于Northern Blot、反转录、polyA 筛选、体外翻译、RNase保护分析和基因克隆 cDNA文库构建、荧光定量PCR、高通量测序等各种分子生物学实验。
操作方法：
自备试剂：氯仿，异丙醇，70％乙醇（DEPC 水配置），RNase Free H2O。
Ⅰ 实验前准备：
RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。
注意事项：
1. 尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前用0.1% DEPC水溶液在 37℃处理 12h，然后在120℃高压灭30 min 以除去残留的 DEPC。
2. 用于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60 min）或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用RNA实验用的一次性塑料容器)，使用的无菌水须用0.1%的 DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。
3. RNA实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。
Ⅱ 实验操作
SupersmartTM TRI RNA裂解液的使用量情况如下
10 cm2 贴壁培养细胞 | 1 ml |
1x106 -10x106悬浮培养细胞 | 1 ml |
50-100 mg 的普通组织样品（肌肉等） | 1 ml |
30-50 mg 的特殊组织样品（肝、脾等） | 1-2 ml |
30-50 mg 的植物材料 | 1 ml |
白细胞（1x106） | 1 ml |
样本量及RNA产量
样本类型 | 样本量 | RNA产量 |
白细胞 | 1x106个 | 10~20 μg |
植物材料 | 25mg | 10~20 μg |
细胞 | 1x106个 | 8~15 μg |
肌肉/脑等组织 | 50mg | 10~25 μg |
肝脏 | 50mg | 100~300 μg |
TRI RNA裂解液使用方法
贴壁细胞 | 悬浮细胞、酵母、细菌 | 动植物组织 | |
1. 样品预处理 | 每10 cm2 生长的培养细胞中倒出培养液，用 PBS 清洗一次，尽可能移除多余的溶液。 | 将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000 rpm 离心2min，弃上清，加入 50μl 无菌水重悬细胞至无明显沉淀。 | 将样品转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状。 |
2. 加入TRI RNA Reagent | 加入 1 ml TRI RNA Reagent，使裂解液均匀分布于细胞表面，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落。将细胞的裂解液转移至1.5ml EP 管中。 | 加入 1ml TRI RNA Reagent。 | 将研磨好的组织加入到装有1 ml TRI RNA Reagent的1.5ml EP 管中。 |
3. 裂解样品 | 加入 TRI RNA Reagent后立即手腕用力上下颠倒至细胞、组织粉末等分散均匀，无块状物。室温静置 5min，使核酸蛋白复合物完全分离。 | ||
4. 加氯仿 | 加入200μl 氯仿，手腕用力振荡 15s，室温放置 5min。 | ||
5. 离心分层 | 13,000rpm，4℃，离心10min，吸取400~600 μl 无色上清至新的 1.5EP 管中。 *注意：不要吸到中间层。 | ||
6. 加异丙醇 | 向上述上清液中加入等体积异丙醇，手腕用力上下颠倒数次，室温放置5~10min。 | ||
7. 离心沉淀总RNA | 13,000rpm，4℃，离心10min，小心倒掉上清，留取底部总RNA沉淀。 | ||
8 漂洗总RNA | 向每管沉淀中加入1ml 预冷的70%乙醇，上下颠倒数次，13,000rpm，4℃，离心10min，小心倒掉上清，留取底部RNA沉淀。 | ||
9. 重复漂洗一次 | 重复步骤8再洗涤一次。 | ||
10. 挥发残留乙醇 | 倒掉洗液，再次短离心10s后，用10 μl Tip头吸干剩余的洗液，开盖置于室温晾干（1~3min），使乙醇挥发干净。 | ||
11. 溶解总RNA | 每管加入 20—100μl TE Buffer或RNase Free H2O溶解总 RNA。 | ||
Fig 1.使用SupersmartTM TRI RNA裂解液提取乳腺癌MDA-MB-231细胞RNA。Thermo NanoDrop 2000：1.7< A260/A280<2.2 ；A,琼脂糖凝胶电泳。B,C，Agilent 2100 Bioanalyzer 检测图谱 RIN>=7.0 and 28S/18S>0.7。
常见问题分析：
1. 抽提率低。可能原因：（a. 样品裂解或匀浆处理不彻底；b. RNA 沉淀未完全溶解）
2. A260/A280<1.65。可能原因：（a. 检测吸光度时，RNA 样品没有溶于水，而溶于了TE中；b．样品匀浆时加的组织量过多；c．分层后，吸取上清液不足 500μl；d．吸取水相时混入了有机相）
3. DNA污染过多。可能原因：（a. 样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多；b. 样品中含有有机溶剂）
解决方法：使用该试剂通常基因组DNA污染含量<0.1ng/μL，如需要彻底去除DNA的污染，请使用SupersmartTM DNase I(含RNA酶抑制剂)（ZS-M11009）消化去除基因组DNA污染。如使用SupersmartTM 高效耐热首链cDNA合成试剂盒（含HL dsDNase）（ZS-M14002）则无需提前消化去除基因组DNA污染，该试剂盒中包含了去除基因组DNA污染的试剂。
注意事项：
该试剂含有强变性剂，请勿直接于皮肤接触或吞咽，若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服，戴手套。
储存：
2-8℃避光保存，可保存2年。
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批号 BC23001 -001
批号 BC23001 -002
