Supersmart 2× 高效SYBR Green qPCR Master Mix (ZS-M1054 )

简介：

实时荧光定量 PCR 就是通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。本产品是采用 SYBR Green光法进行实时荧光定量PCR，即qPCR (Quantitative PCR)或real-time PCR的高品质预混液，主要用于cDNA和基因组DNA等的特异性超高灵敏度定量检测。SYBR Green I在游离状态下的荧光比较微弱，一旦与双链DNA结合后，其荧光会大大增强。通过检测荧光强弱就可以定量检测PCR过程中扩增产生的双链DNA的数量。本SYBR Green qPCR Mix将化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶、反应Buffer、dNTP、适当的SYBR Green染料等试剂预混在一起，是一种 2×浓度的单组分预混试剂，进行实验时，PCR 反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、模板、水即可。制品中的DNA聚合酶为化学法修饰的 Hot Start Taq DNA 聚合酶，该酶在 50℃以下100%无活性，只有95度条件下孵育15min 后才能完全恢复酶的活力，因此该系统可以有效避免在低温条件下由引物和模板DNA非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围中检测更灵敏，信号更强，显著提高了PCR的扩增效率。具有高扩增效率、高扩增特异性和宽广的可信范围的特点，对于不同来源、不同丰度的目的基因都具有良好的适应性和准确的定量结果。本产品具有广泛的样本普适性，对具有复杂高级结构的模板、PCR抑制剂残留较多的模板以及长片段扩增等具有非常好的适用性。在不影响PCR效果的前提下更快获得结果，节约科研时间和能源。

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，该试剂可应用于所有 RealTime PCR 机型，包括：ABI 7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)；LightCycler (Roche Diagnostics)； Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad&MJ)；Eco qPCR（Illumina）；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。

注意事项：长期-20℃保存可能会出现沉淀，室温融化后务必轻柔混合均匀。避免反复冻融。本产品中含有荧光染料SYBR Green，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

操作方法：

1. 根据机型选择步骤 A 或 B

A: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time PCR仪，包括：ABI PRISM7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)等。

按照如下组分配制20 μl PCR反应体系：

 B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time PCR 仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)；MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Eco qPCR（Illumina）；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。

按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系：

2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法，程序如下：

Stage 1: 95℃ 15 min*

Stage 2: 95℃ 10s

60℃ 30s  35~40 cycles

Stage 3: 溶解曲线（该步骤使用PCR仪器默认程序即可）

注意：由于该酶为化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶，必须于 95℃加热15min 才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短时间。

3. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。

Fig 1.Supersmart^TM TRI RNA裂解液提取的小鼠心肌细胞HL-1的RNA，中实基因第四代高效耐热MuLV反转录酶反转的 cDNA为模板，不同品牌qPCR Mix进行荧光定量PCR检测Actin和MCP基因。

储存：

(1) 长期保存，请避光置于-20℃或-80℃可保存2~3年。

(2) 经常使用，融化后可置于 4℃，可保存1年。

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