简介:
该提取试剂盒采用基于异硫氰酸胍/苯酚法的优化的独特的裂解液,RNA与硅胶膜离心柱特异地结合,可快速高效从抗凝全血样本中纯化出高纯度的总 RNA,快速有效去除细胞中基因组DNA和蛋白质,使获得的RNA 纯度高,稳定性好。总RNA包括大于200个核苷酸的RNA(也常被称为总RNA)和小于200个核苷酸的小RNA(small RNA)。本试剂盒具有高效、快速、方便的特点,总时长仅需6 min左右。是目前国际上操作步骤最少、用时最短的血液RNA提取试剂盒之一。所获得的RNA可直接用于反转录、基因克隆、定量检测、体外翻译、RNase protection assay, 也可用于基因表达芯片分析(microarray)、文库构建、杂交等多种分子生物学实验。
注意事项:
(1) 本试剂盒中的Washing Buffer 中已经加乙醇,无需单独添加。
(2) Solution R1和Solution R2均具有腐蚀性,注意防护。
(3)加入Buffer EL后于4°C低温离心
操作方法:
(1)裂解/上柱
取1ml 人血液等材料,放入到 EP 管中,加入三倍体积Buffer EL,轻轻涡旋或颠倒混匀,冰上放置15分钟,其间轻轻涡旋混匀两次,待溶液清亮透明于4°C,450xg离心10分钟以沉淀白细胞,小心弃上清后再加入2ml Buffer EL,轻轻涡旋重悬白细胞。于4°C,450xg离心10分钟,小心弃上清后加30~100 μL 水或PBS重悬细胞沉淀。加入120μl Solution R1漩涡混匀30s,加入500μl Solution R2上下颠倒混合均匀,倒入吸附柱中。13000rpm 离心30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
(2)洗涤和洗脱
向吸附柱中加入500μl RNA Washing Buffer,13000rpm 离心15s。重复此步骤一次。将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心1min,将残留的乙醇彻底甩干。 将吸附柱芯放入到 1.5 mL Nuclease Free 收集管中,向吸附柱芯中加入20~50μl Nuclease Free H2O,室温放置1min,13,000rpm 离心1min,洗脱液即为提取的RNA,冷冻保存。
储存:
Buffer EL于4℃保存,其他组分室温避光保存,试剂盒保质期2年。
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