Superbrilliant 血清血浆miRNA提取试剂盒 (ZS-M15007)

简介：

使用该试剂盒提取的小RNA（Small RNA）中，长度在15-200nt范围的RNA在95%以上，基本不含有大RNA和DNA。血清血浆miRNA提取试剂盒是目前世界上提取小RNA（<200nt）操作步骤最简单、重复性最好、小RNA产率最高的方法之一。使用该试剂通过一步上柱即可获得高纯度miRNA，可在12min内完成小RNA的提取。该试剂盒提取产物可直接用于后续的反转录、Northern 杂交、测序等应用。

操作方法：

(1) 向1.5ml EP管中加入800μl 血清血浆 miRNA 裂解液。将 300μl 血清或血浆样本加入到上述800μl 血清血浆 miRNA 裂解液中，用腕力混匀30s，室温放置5min。

(2) 13,000rpm 离心5min，将上清约 1ml 倒入到新的 2ml EP 管中。加入 1ml 异丙醇，上下颠倒混合均匀。

(3) 将上述溶液分三次倒入到吸附柱中（每次约 700μl）， 13,000rpm 离心 15s，倒掉过柱液。

(4) 向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇洗涤一次，13,000rpm 离心 15s，倒掉过滤液。

(5) 向吸附柱中加入 500μl 无水乙醇洗涤一次，13,000rpm 离心 15s，倒掉过滤液。

(6) 吸附柱 13,000rpm 空离心 2min，去掉残留的乙醇。

(7) 将吸附柱放入到新 1.5ml EP 管中，室温放置 2min，使 残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入 30μl Rnase Free H₂O，室温静置 2min，13,000rpm 离心 2min，洗脱产物即为提取的 miRNA。通常取 10μl 该产物，即可使用Superbrilliant^TM miRNA反转录试剂盒（TaqMan法适用于血清血浆样本) 进行反转录反应（货号：ZS-M15005）。

常见问题汇总：

(1) 由于血清血浆中 miRNA 的含量低，为了获得更可靠的 实验数据，建议使用特异性和灵敏度更好的 TaqMan 探针法进行 miRNA 的下游检测。本试剂盒提取的 miRNA 并不限于其它检测方法和用途，包括 SYBR Green 法检测、二代测序、 芯片等检测领域。

(2) 由于血清血浆中的 miRNA 含量极低，提取的 miRNA 浓度通常在 10ng/μl 以下，因此难以用常规的 NanoDrop 测量浓度，建议直接使用 10μl 进行下游反转录。由于本试剂盒提取的是小RNA，该浓度下的 miRNA Copy 数足以进行下游检测。

(3) Superbrilliant^TM miRNA反转录试剂盒（TaqMan法适用于血清血浆样本) （货号：ZS-M15005）为血清血浆专用，不可用于细胞和组织的 miRNA 检测实验。使用Superbrilliant^TM miRNA反转录试剂盒（TaqMan法适用于血清血浆样本）（货号：ZS-M15005）获得的反转录产物仅可使用本公司优化的Superbrilliant^TM TaqMan miRNA定量PCR试剂盒（货号：ZS-M15006）。在使用ZS-M15005反转录条件下，应用ZS-M15006配合Superbrilliant^TM TaqMan hsa-miR-16定量PCR探针(货号：ZS-MT01511)适用于来源于人、鼠全血样品，检测内源 hsa-miR-16， Ct 值通常在 24 左右。

(4)外源性内参可单独订购cel-miR-39标准品（货号：ZS-M01513-STANDARD），每个样品每次提取 cel-miR-39 的使用量为 50fmol。

使用防护建议：

血清血浆 miRNA 裂解液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。

自备试剂：

异丙醇、乙醇、75%异丙醇、EP 管

储存：

室温可保存2年。

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