Superbrilliant 全血miRNA提取试剂盒 (ZS-M15006)

1.对miRNA进行加A反应           2.反转录获得miRNA的cDNA产物            3.利用TaqMan探针进行qPCR检测

简介：

使用该试剂盒提取的小RNA（Small RNA）中，长度在15~200nt范围的RNA在95%以上，基本不含有大RNA和DNA。全血miRNA提取试剂盒是目前世界上提取小RNA（<200nt）操作步骤最简单、重复性最好、小RNA产率最高的方法。使用该试剂通过一步上柱即可获得高纯度miRNA，可在45min内完成小RNA的提取。该试剂盒适用于冻存和新鲜的抗凝全血样本（注意该试剂盒不适用于血清和血浆）。

用途：

提取的RNA没有DNA和蛋白污染，可应用于后续分子杂交, 实时定量PCR和miRNA芯片等分子生物学实验。

操作方法：

(1)向1.5ml EP管中加入300μl miRNA Solution A。将150μl抗凝全血加入到上述300μl miRNA Solution A中，立即手腕用力震荡混合均匀。室温静置5min以充分裂解细胞。

(2)向上述裂解完毕的裂解液中加入250μlmiRNA Solution B，上下颠倒混合均匀。13,000rpm离心5min，吸取550μl上清液，转移到新的1.5ml EP管中。

(3)向上述溶液中加入200μl无水乙醇，手腕用力震荡数次，室温放置5min。

(4)13,000rpm离心10min，转移700μl上清液到新的1.5ml EP管中。

(5)向上述溶液中加入300μl异丙醇，手腕用力上下颠倒数次。

(6)分两次将上述溶液倒入到miRNA吸附柱中，13,000rpm离心1min，倒掉过滤液。

(7)向吸附柱中加入700μl75%异丙醇洗涤一次，13,000rpm离心1min，倒掉过滤液。

(8)向吸附柱中加入500μl无水乙醇洗涤一次，13,000rpm离心1min，倒掉过滤液。

(9)吸附柱13,000rpm空离心2min，去掉残留的乙醇。

(10)将吸附柱放入到新1.5ml EP管中，室温放置2min，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μlRnaseFree TE Buffer，室温静置2min，13,000rpm离心2min，洗脱产物即为提取的miRNA。（通常取3～5μl该产物，即可使用SuperbrilliantTM miRNA反转录试剂盒（TaqMan法）进行反转录反应，货号：ZS-M15004）。

常见问题汇总：

(1) 本方法提取的小RNA，95％以上为小RNA（<200nt），有时会残留一些>200nt的RNA，通常残留的>200ntRNA不影响后续试验操作。

(2) 本试剂盒提取的小RNA由于不含mRNA等大分子量的RNA，因此更适合做后续反转录试验，从而进行定量试验。

(3) 使用本试剂盒提取的microRNA浓度通常在50ng/μl左右，取5～10μl即可用于电泳检测。取3~5μl即可用于SuperbrilliantTM miRNA反转录试剂盒（TaqMan法）进行反转录反应（货号：ZS-M15004），通常使用SuperbrilliantTM TaqMan miRNA定量PCR试剂盒（货号：ZS-M15006）配合探针使用（货号：ZS-MTXXXXX）。

使用防护建议：

miRNA Solution A溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。

自备试剂：

异丙醇、乙醇、75%异丙醇

储存：

室温可保存2年。

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