Superbrilliant miRNA反转录试剂盒（TaqMan法） (ZS-M15004)

简介：

SuperbrilliantTM miRNA反转录试剂盒（TaqMan法）采用加A法进行反转录，加A法的反转录效率远高于茎环法，因此，采用该方法可极大的提高检测灵敏度（原理见图1）。该试剂盒操作简单，仅需要两步即可轻松完成miRNA的cDNA合成，合成的cDNA可用于所有miRNA的后续定量检测。反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物进行PCR扩增，FAM标记TaqMan探针作为荧光报告基团进行定量检测（原理见图1）。

图1，SuperbrilliantTM TaqMan miRNAs定量检测原理

用途：

Superbrilliant^TM miRNA反转录试剂盒（TaqMan法）专用于miRNAs分子的反转录试验，转录获得的cDNA产物用于TaqMan定量PCR方法检测miRNAs分子（仅适用Superbrilliant^TM TaqMan miRNA定量PCR预混液检测(货号：ZS-M15002，配合Supersmart^TM TaqMan miRNA定量PCR探针使用，货号：ZS-MTXXXXX使用）。

操作方法：

1  按以下组分在0.2ml EP管中配制应液

2  在PCR仪上按以下条件进行加A反应:

3  反应完毕后，在上述 5μl 反应体系中加入如下试剂，并混合均匀。

4  在PCR仪上按以下条件进行反转录反应:

获得的cDNA产物可用于多个目标miRNA的检测。反转录完毕后获得的miRNA cDNA，可加入 20~80μl ddH₂0 稀释 2~5 倍，通常取2μl即可用于Superbrilliant^TM TaqMan miRNA定量PCR预混液检测(货号：ZS-M15002，配合Supersmart^TM TaqMan miRNA定量PCR探针使用，货号：ZS-MTXXXXX使用，该探针有一万余种，详细列表可查询Superbrilliant^TM TaqMan miRNA qPCR kit.xls)。

5 利用Superbrilliant^TM TaqMan miRNA定量PCR预混液和探针对上述miRNA cDNA产物进行RealTime PCR检测

内参基因可选择使用：Superbrilliant^TM TaqMan RNU6B定量PCR探针(货号：ZS-MT01501))适用于人、鼠等哺乳动物组织、细 胞样品； Superbrilliant^TM TaqMan miR-16定量PCR探针(货号：ZS-MT01511)适用于来源于人、鼠全血样品。

（1）配制反应体系

根据机型选择步骤A或B

A: 需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪，包括：ABI7000/7300/7500/7900等。按照如下组分配制20μl PCR反应体系：

B:无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪，包括：LightCycler (Roche)；MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad)；Line-Gene(杭州博日)等。按照如下组分配制20μl PCR反应体系：

（2）进行Real-Time PCR反应

通常采用两步法，程序如下：

（收集信号采用FAM染料通道）

反应结束后确认Real-Time PCR的cDNA样品和NTC阴性对照的扩增曲线(hsa-miR16)。

储存：

请置于-20°C，可保存2年；避免反复冻融。 

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