Superbrilliant TaqMan miRNA定量PCR预混液 ( ZS-M15002)

简介：

Superbrilliant^TM TaqMan miRNA定量PCR预混液，含有定量试剂TaqMan qPCR Mix和ROX校正染料，其中 5×TaqMan qPCR Mix 将化学修饰的热启动 Taq DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试剂预混在一起，是一种5×浓度的单组分预混试剂，与抗体封闭的酶相比，化学修饰的酶活性维持更加稳定。独有的封闭技术使得该酶在50°C以下，化学小分子和酶活性中心结合，酶100%无活性。仅通过95°C加热15min后，酶活性中心暴露，才能完全恢复活性，从而启动PCR扩增，提高PCR扩增的特异性，能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。随着热循环的不断进行，剩余的酶活会源源不断地释放出来，这就使得此酶克服了常规Taq酶容易出现平台期的弊端，其扩增效率大大提高，提高特异性PCR产物的产量、准确性和精确性。使用本产品进行PCR反应时可以在室温操作，并能有效避免室温操作时由于普通Taq酶（普通的Taq DNA聚合酶的最适温度是72℃）或其它耐热DNA聚合酶存在活性而导致的非特异性PCR背景。使用时无需额外的高温孵育步骤以释放Taq酶活性。该酶具有5’-3’外切酶活性，可用作TaqMan探针的定量PCR。进行实验时，该预混液配合Supersmart^TM TaqMan miRNA定量PCR探针使用可以特异性、高灵敏度的检测低至100个细胞的miRNA分子。

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，该试剂可应用于所有 RealTime PCR 机型，包括：需要添加 ROX 染料：ABI 7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)；无需添加 ROX 染料：LightCycler (Roche Diagnostics)；Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad&MJ)；Eco qPCR（Illumina）；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。

内参基因可选择使用：

（1）Supersmart^TM TaqMan RNU6B定量PCR探针(货号：ZS-MT-RNU6B)适用于人、鼠等哺乳动物组织、细胞样品；

（2）Supersmart^TM TaqMan miR-16定量PCR探针(货号：ZS-MT-miR-16)适用于来源于人、鼠全血样品。

图1, Superbrilliant^TM TaqMan miRNAs定量检测原理

操作方法：

1. 配制反应体系

根据机型选择步骤 A 或 B

A: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time PCR 仪，包括：ABI 7000/7300/7500/7900 等。按照如下组分配制20 μl PCR反应体系：

注意：cDNA模板来自于miRNA反转录试剂盒（TaqMan法）反转录产物(货号：ZS-M15004或ZS-M15005)。

B:无需添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的 Real-Time PCR 仪，包括：LightCycler (Roche)；MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad)；Line-Gene(杭州博日)等。按照如下组分配制20 μl PCR反应体系：

注意：cDNA模板来自于miRNA反转录试剂盒（TaqMan法）反转录产物（货号：ZS-M15004或ZS-M15005）。

2. 进行Real-Time PCR反应

通常采用两步法，程序如下：

（收集信号采用FAM染料通道）

储存：

可避光置于-20℃，保存2年，避免反复冻融。

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批号BJ22001-001