Supersmart 超敏Plus ECL化学发光底物 (ZS-PR22004)

简介：

Supersmart^TM 超敏ECL化学发光底物用于Western、Northern和Southern blot分子杂交的化学发光检测，比传统化学显色法灵敏度高，可达pg水平。该产品基于新一代增强型化学发光底物研制而成，采用新型发光底物（Luminol），用于检测辣根过氧化物酶HRP标记的抗体及其关联的抗原，其与二抗上偶联的辣根过氧化物酶反应时产生发光信号强烈持久，在暗室中对X-光片感光或者用化学发光成像仪进行检测，可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子，可以此检测微量蛋白而获得理想的实验结果。发光液A主要成分为Luminol及特制发光增强剂，发光液B主要成分H₂O₂及特殊稳定剂。发光液A与B在辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下，鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定随机分解，形成一种能发光的电子激发中间体，当后者由激发态返回至基态，就会产生荧光。增强型ECL显色液具有灵敏度高，持续时间长等特点。

用途： 

在Western印迹分析，核酸杂交以及EMSA实验中，HRP标记的二抗或探针与靶分子结合再与底物反应产生可见光。

操作方法：

（以 Western Blot为例)

1．按每平方厘米膜面积用0.1-0.2 ml配置显色液：根据显色液的需要量，取等体积A液和B液，混匀后避光保存备用；该显色液必须现配现用。

2. 取出膜，平放在干净的保鲜膜上，膜的正面（蛋白质面）朝上，在膜的中央加适量的配置好的显色液（6×8 cm 的膜加2 ml显色液），溶液向四周迅速扩散，覆盖所有膜面。室温保温5分钟左右，在此过程中请仔细观察信号的出现。注意：如果信号强，在暗室中能很快看到阳性信号出现。

3. 待信号出现且稳定后，用镊子夹起膜，除去多余的显色液，平放在干净的保鲜膜上，膜的正面（蛋白质面）朝上，在转移膜的上面再覆盖一层保鲜膜，除去保鲜膜与转移膜之间的空气泡，请务必保证保鲜膜是干净的，不被其他杂物或液体污染。

4. 在暗室中，将膜的正面对着 X-光片，放入暗盒。第一次曝光时间在 1 分钟左右(有经验的操作者可以根据信号的强弱自行决定)，立即按要求对 X-光片进行显影和定影，确定最佳曝光时间。曝光时间从数秒到数小时不等；特别弱的过夜曝光也可。

注意事项：

1.PVDF膜较硝酸纤维膜能更好的结合蛋白，因此呈现较强的信号。选高质量的PVDF膜；尽可能不用Nylon膜。

2.与抗体结合以后，要保证膜处于湿润状态，否则会导致背景较高。

3.没有信号的原因：有些抗体不识别变性抗原，有时需要考虑电泳过程对蛋白质结构的影响；样品中无待测蛋白质或含量过低；一抗效价低，用量少，可适当增加一抗的用量；

4.背景过高原因：转移膜封闭不充分；与抗体孵育后洗涤不彻底；膜在处理过程中过干；二抗用量过多等。

5.注意及时更换显影液、定影液。

6.A液和B液在吸取过程中必须要更换枪头，A液和B液相互污染后会导致A液或B液逐渐失效，影响后续的使用效果。

7.开始反应后的30分钟内萤光更强一些，随后萤光会逐渐减弱，因此请注意充分利用这萤光较强的30分钟进行压片。

Fig 1. Western blot检测HL-1细胞、大鼠肾组织裂解的β-actin蛋白，应用ECL发光液分别显色，一抗为β-actin鼠单抗1：1000稀释。

储存：

2-8°C，Super ECL A要求避光保存。 

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批号10001-001