Supersmart WB超能高效RIPA裂解缓冲液 (ZS-PR21001)

简介：

WB超能高效RIPA裂解缓冲液主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白，是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。可高效提取细胞膜、胞浆、细胞核蛋白。不能用于Co-IP/IP试验。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。提取的蛋白可用于SDS-PAGE、Western Blot、ELISA、酶活性分析等后续实验。       

根据试验情况推荐选择组合

蛋白酶及磷酸酶抑制剂组分及抑制性能

操作方法：

制备 Western Blot 杂交蛋白样品

1. 对于培养细胞样品（0.5-10×10⁶个）：

(1). A: 非磷酸化蛋白的提取：在使用前数分钟内向WB Super RIPA裂解液中，加入蛋白酶抑制剂混合物 A (ZS-PR21003)，使其最终浓度为1×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液，加入2.5 μl 蛋白酶抑制剂混合物 A，混合均匀，待用。

B: 磷酸化蛋白的提取：在使用前数分钟内向 WB Super RIPA 裂解液中，加入蛋白酶抑制剂混合物A 、磷酸酶抑制剂混合物B 、磷酸酶抑制剂混合物C (ZS-PR21004)各2.5 μl，使其最终浓度为1×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液，加入2.5 μl蛋白酶抑制剂混合物A、2.5 μl磷酸酶抑制剂混合物B 、2.5 μl 磷酸酶抑制剂混合物C，混合均匀，待用。

注意：加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂后的WB Super RIPA裂解液可于-20°C保存2个月，性能不会有下降；加入Benzonase核酸酶（ZS-PR23001）至终浓度为 0.25 U/μl，可有效降低样品粘度提高蛋白提取效率。

(2). 离心收集细胞，弃上清。加入250 μl上述配制好的裂解液，枪头或旋涡振荡混合均匀。冰上放置30min。

(3). 样品裂解后，13,000 rpm离心5min，取上清，即为所提取蛋白。

2. 对于组织样品：

(4). 组织用研钵（或匀浆器）研磨充分至细小颗粒。

(5). 按照每10 mg组织加入250 μl裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当增加裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)，冰上放置30min。

(6). 样品裂解后，13,000 rpm离心5min，取上清，即为所提取蛋白。

(7). 提取完蛋白后可利用BCA蛋白定量试剂盒(ZS-PR25001)测定蛋白浓度。

Fig1. MDA-MB231细胞6×10⁵细胞/管，每管加入100 ul裂解液，冰上孵育15 min，收集上清获取蛋白。20 mg乳腺癌组织加入400 ul RIPA，超声破碎获取蛋白。100°C煮10分钟使之变形，ECL显影。

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批号BA06004-001