简介:
该试剂盒采用独特的裂解液,裂解细胞释放基因组DNA,由硅胶膜柱在高盐浓度下可逆吸附基因组DNA,并在低浓度盐和微碱条件下释放DNA。经蛋白酶消化、漂洗液清洗,可快速可靠的从动物组织、细胞、细菌、病毒、全血、血清、血浆、体液、病毒液、棉拭孖等样品中纯化出高纯度的 DNA。本试剂盒可最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。提取的基因组DNA片段大,产量高,纯度好,稳定可靠。可以抽提除植物样品外的几乎所有样品中的总DNA。
用途:
应用本试剂盒提取的DNA无蛋白、核酸酶污染,可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern杂交等多种分子生物学实验。
操作方法:
(一)RNA 含量较高的动物组织、细胞、细菌样本的提取方法
(1) 样品组织悬液的制备:
动物组织用研钵研磨:将动物组织研磨粉碎,并取40~60 mg 加入到1.5 ml EP 管中,加入280 μl无菌水,漩涡震荡10 s混合均匀,打开管盖加入50 μl的Solution I和5 μl的RNase A,漩涡震荡 10 s 混合均匀,室温消化5 min,以去除RNA。
动物组织用钢珠研磨:取50~80 mg组织加入到400 μl无菌水,在研磨仪上研磨1 min。在1.5 ml EP 管底部加入 50 μl 的Solution I,并在管盖上加入5 μl的RNase A,取280 μl研磨好的组织悬液到 1.5 ml EP 管中,漩涡10 s混合均匀,室温消化 5min,以去除RNA。
悬浮的细胞(104 ~108 个)或细菌(106 ~1011个):在1.5 ml EP 管底部加入50 μl的Solution I,并在管盖上加入5 μl的RNase A,直接吸取280 μl样品到上述 EP管中,漩涡震荡10s混合均匀,室温消化5 min,以去除RNA。
细胞或细菌沉淀:可用280 μl无菌水重悬细胞和细菌沉淀,并加入50 μl的Solution I和5 μl RNaseA,漩涡震荡10 s混合均匀,室温消化 5 min,以去除 RNA。
(2)RNA 消化完毕后,向上述溶液中加入20 μl的Protease K,漩涡10s混合均匀,并置于 56℃水浴锅(或室温条件下)中消化 5 min。
(3)消化完毕后,向上述溶液中加入500 μl的Solution II ,漩涡混合15 s后,13000 rpm最高转速离心2 min。将上清液倒入到吸附柱中。
(4)13000 rpm离心1 min,弃过柱液。向吸附柱中加入500 μl的Washing Buffer,13000 rpm 离心 15 s。弃过柱液,并重复此步骤一次。
(5)将吸附柱重新放回离心机,13000 rpm 空离心2 min,将残留的乙醇彻底甩干。
(6)将吸附柱芯放入到1.5 ml收集管中,向吸附柱芯中加入60~150 μl EB ,室温放置1 min,13,000 rpm离心 2 min,洗脱液即为基因组 DNA,冷冻保存。
(二)RNA 含量较低的样本(全血、血清、血浆、体液、病毒液、棉拭孖浸泡液等)的提取方法
在 1.5 ml EP 管底部预先加入 50 μl 的 Solution I,在管盖上加入 20 μl 的Protease K,直接吸取 280 μl 的液体样本到 Solution I中。上下颠倒,并漩涡混合 10s,使得样品、裂解液Solution I、Protease K 混合均匀,并置于 56℃水浴锅中(或室温)消化 5 min。
按照上述步骤(3)-(6)进行上柱、漂洗、洗脱操作。

Fig 1.应用Superbrilliant®18 min Global Genomic DNA Extraction Kit提取的各种组织样本的基因组DNA。M为DNA Marker 10000。
注意事项:
(1)本试剂盒中的Washing Buffer中已经加乙醇,无需单独添加。
(2)适用于:动物组织/细胞/细菌/病毒/全血/血清/血浆/体液/棉拭孖
储存:
(1)蛋白酶 K(20 mg/ml)、RNase A(20 mg/ml)长期保存请储存于-20 ℃,短期室温保存(6 个月),其它组分储存于室温避光保存。
(2)该试剂盒的保质期为2年。
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