Superbrilliant® 18分钟快速高纯细胞基因组DNA提取试剂盒 (ZS-M11001)

简介：

该试剂盒采用独特的裂解液，裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱在高盐浓度下可逆吸附基因组DNA,并在低浓度盐和微碱条件下释放DNA。经蛋白酶消化、漂洗液清洗，可快速可靠的从细胞样本中纯化出高纯度的DNA，最大限度的去除蛋白、色素、脂类等杂质污染。应用本试剂盒获取的DNA纯度高，无抑制剂，A260/A280为 1.6-1.9。

用途：

应用本试剂盒提取的DNA无蛋白、核酸酶污染，可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern杂交等多种分子生物学实验。

操作方法： 

（1）样本处理（1.5 ml EP 管中处理）

贴壁培养细胞（<10⁶个）: 胰酶消化完毕后，离心收集细胞沉淀，用 50 μl 水重悬细胞沉淀，加入 5 μl Rnase A和100μl Solution B1漩涡 15 s，56 ℃水浴锅中消化 5 min。

悬浮培养细胞（<10⁶个）：直接离心收集细胞沉淀，用 50 μl水重悬细胞沉淀，加入 5 μl RnaseA 和 100 μl Solution B1漩涡 15 s，56 ℃水浴锅中消化 5 min。

（2）向上述准备好的样品溶液中加入20 μl 蛋白酶K漩涡混合均匀 15 s，56℃水浴锅中消化 5 min。

（3）加入700μl Solution B2漩涡震荡混合均匀 1 min，13000 rpm离心3 min。

（4）将上清液倒入到吸附柱中，13000 rpm离心1 min。

（5）倒掉废液。向吸附柱中加入500 μl Washing Buffer，13000 rpm 离心15 s。重复此步骤一次。

（6）将吸附柱重新放回离心机，13000 rpm 空离心 2 min，将残留的乙醇彻底甩干。

（7）将吸附柱芯放入到 1.5 ml 收集管中，向吸附柱芯中加入60~150 μl EB（EB预热到65℃将提高洗脱产量），室温放置 1min，13,000rpm 离心1 min，洗脱液即为基因组 DNA，冷冻保存。 

Fig 1. 以Superbrilliant^®18 min Fast/High quality Cell Genomic DNA Extraction Kit提取的4只小鼠脾细胞基因组为模板扩增KLF4基因。

常见问题：

堵塞离心柱

原因和解决方法：

（1）样品量过大，减少细胞的用量；（2）细胞沉淀重悬不充分，导致细胞团块未能完全裂解。（3）已经发生堵塞现象，请用 200 μl 吸头在滤芯上，轻划几次，再进行后面离心步骤，并延长离心时间，一般不会影响 DNA产量。

注意事项：

（1）本试剂盒中的Washing Buffer中已经加乙醇，无需单独添加。 

（2）Solution B1储存时可能会有白色结晶沉淀，放置于56 ℃水浴锅溶解后，不影响使用效果。

储存：

（1）Protease K（20 mg/ml）、Rnase A（20 mg/ml）长期保存请储存于-20 ℃，短期室温保存（6 个月），其它组分储存于室温避光保存。

（2）该试剂盒的保质期为2年。 

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