简介:
该试剂盒采用独特的裂解液,在高盐浓度下使DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,并在低浓度盐和微碱条件下释放DNA。可快速可靠的从抗凝全血样本中纯化出高纯度的基因组 DNA,最大限度的去除蛋白、色素、脂类等杂质污染。应用本试剂盒获取的DNA纯度高,无抑制剂,DNA片段大,产量高,稳定可靠。A260/A280为1.6-1.9。
用途:
应用本试剂盒提取的 DNA无蛋白、核酸酶污染,可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern杂交等多种分子生物学实验。
操作方法:
(1)样本处理(1.5或2 ml EP管中处理)
人抗凝全血:吸取 0.2~0.8 ml 抗凝全血加入到800 μl Buffer EL中上下颠倒混合均匀,13000 rpm 离心30 s,去上清,留白细胞沉淀,用50 μl 水重悬白细胞沉淀(有少量红细胞残留并不影响 DNA 的产量,如仍然有大量红细胞未裂解,可再次用Buffer EL将红细胞裂解)。
淋巴细胞分离液分离出的白细胞:直接吸取50~80 μl白细胞。
有核红细胞抗凝全血(禽血):吸取10 μl抗凝全血加入到50 μl无菌水中,漩涡震荡混合均匀。
(2)向上述准备好的样品溶液中加入100 μl Solution B1和20 μl Protease K漩涡混合均匀10s,56℃水浴锅中消化5~30 min(长时间消化可提高 DNA 的产量)。
(3)加入700 μl Solution B2漩涡震荡混合均匀 1 min,肉眼观察有无未溶解的血凝块,如果无血凝块,则直接倒入到吸附柱中,13000 rpm 离心 1 min。
注意:如果有未溶解的血凝块,则短离心去除血凝块后,再倒入到吸附柱中,进行后续离心操作。
(5)倒掉废液,向吸附柱中加入500 μl Washing Buffer,13000 rpm 离心 15 s。重复此步骤一次。
(6)将吸附柱重新放回离心机,13000 rpm 空离心 2 min,将残留的乙醇彻底甩干。
(7)将吸附柱芯放入到 1.5 ml 收集管中,向吸附柱芯中加入 60~150 μl EB(EB预热到65℃将提高洗脱产量),室温放置 1 min,13,000rpm 离心1 min,洗脱液即为基因组DNA,冷冻保存。
Fig 1.应用Superbrilliant®16 min High-quality Blood Genomic DNA Extraction Kit、A公司、T公司和Q公司的血液提取试剂盒分别按其说明书提取人外周血样品的DNA,提取血量分别为250μl和500μl。
注意事项:
(1)本试剂盒中的 Washing Buffer 中已经加乙醇,无需单独添加。
(2)Solution B1储存时可能会有白色结晶沉淀,放置于56℃水浴锅溶解后,不影响使用效果。
储存:
(1)Protease K(20 mg/ml)长期保存请储存于-20℃,短期室温保存(6个月),其它组分储存于室温避光保存。
(2)该试剂盒的保质期为 2 年。
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