Superbrilliant® 一步法 rTth qRT-PCR 预混液（ZS-M13010）

简介:

      rTth qRT-PCR预混液中使用热启动rTth DNA/RNA 聚合酶，该聚合酶经电子重构架技术，改变了Tth DNA/RNA聚合酶的活性配体中心，使其在Mg²⁺条件下仍然具有极强的逆转录活性，不再受限于反应Buffer系统，rTth DNA/RNA Polymerase在Mg²⁺条件下对于DNA模板和RNA模板扩增能力几乎无偏差。2×rTth Master Mix为进行RNA探针RT-PCR的专用预混试剂，可高灵敏的检测RNA分子。可用于扩增粗样品，性能卓越。无需抽提、纯化核酸即可进行扩增检测，尤其适用拭孖样本。

热启动rTth DNA/RNA聚合酶的特性：

（1）依赖于DNA模板的聚合酶活性；

（2）极强的依赖于RNA模板的逆转录活性；

（3）5'-3'外切酶活性，用于探针切割；

（4）金属配体离子为Mg²⁺，通常使用浓度2~3.5mM；

（5）相比于Tth DNA聚合酶，rTth的耐热性能有所下降，92℃条件下的半衰期为30min；

（6）热启动rTth在50℃条件下100%无活性，92℃加热5min后恢复活性；

（7）以RNA为模板进行RT-PCR扩增的最大长度为280bp，扩增效率最高的长度为70-150bp。

操作方法:

1. 按照如下组分配制20μl RT-qPCR反应液：

 *注   （1）全部组分添加之后，请充分混匀反应液，再进行反应｡

（2）引物和探针的使用浓度可在0.1-0.8ul直接调整。

2.Direct One-Step qRT-PCR程序

Stage 1: 92℃       5min        热启动

Stage 2: 60℃       5min        逆转录

Stage 3: 92℃       10s          

               60℃       30s         35-45 cycles

*注rTth DNA/RNA Polymerase的最佳变性温度为92℃，其它温度条件都会导致试剂性能下降。逆转录步骤的温度可根据实际情况在58-72℃调整。

储存：

长期保存，请避光置于-20°C可保存3年。

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