简介：
rTth RT-qPCR预混液中使用热启动rTth DNA/RNA聚合酶，该聚合酶经电子重构架技术，改变了Tth DNA/RNA聚合酶的活性配体中心，使其在Mg2+条件下仍然具有极强的逆转录活性，不再受限于反应Buffer系统，rTth DNA/RNA Polymerase在Mg2+条件下对于DNA模板和RNA模板扩增能力几乎无偏差。2×rTth Master Mix为进行RNA探针RT-PCR的专用预混试剂，可高灵敏的检测RNA分子。可用于扩增粗样品，性能卓越。无需抽提、纯化核酸即可进行扩增检测，尤其适用拭孖样本。
rTth Master Mix(with UDG)中dTTP大部分被dUTP替代，因此扩增产物带有dUTP碱基，在配合热敏UDG（该酶在92℃热变性5min后不可逆失活，不影响后续PCR反应）消化的情况下，可有效降低气溶胶污染现象。实验证明，在105copies污染物的测试条件下，Ct值推迟12个以上（污染去除能力>99.98%），因此该预混液在一步法qPCR反应中具有良好的去除核酸气溶胶污染的能力。
主要特性：
（1）可有效使用dUTP，具备良好的去除核酸气溶胶污染能力；
（2）依赖于DNA模板的聚合酶活性；
（3）极强的依赖于RNA模板的逆转录活性；
（4）5'-3'外切酶活性，用于探针切割；
（5）以RNA为模板进行RT-PCR扩增的最大长度为280bp，扩增效率最高的长度为70-150bp。
操作方法:
1. 按照如下组分配制20μl qRT-PCR反应液：
2×rTth Master Mix(with UDG) | 10μl |
上游引物（10μM） | 0.4-0.8μl |
下游引物（10μM） | 0.4-0.8μl |
荧光探针（10μM） | 0.2-0.4μl |
RNA | Xμl |
ddH2O | Up to 20μl |
*注 （1）全部组分添加之后，请充分混匀反应液，再进行反应｡
（2）引物和探针的使用浓度可在使用范围内直接调整。
2.Direct One-Step qRT-PCR程序
Stage 1: 25℃ 2min 消化污染
Stage 2: 92℃ 5min 热启动
Stage 3: 60℃ 5min 逆转录
Stage 4: 92℃ 10s
60℃ 30s 35-45 cycles
*注 （1）rTth DNA/RNA Polymerase的最佳变性温度为92℃，其它温度条件都会导致试剂性能下降。逆转录步骤的温度可根据实际情况在57-70°C调整。
（2）消化污染步骤中的温度设置可在25-37°C间，但高于42°C会导致热敏UDG消化能力急剧下降。
储存：
-20℃避光可保存 2 年。短期使用可放置 2-8℃，保存 3 个月。如出现白色沉淀溶解后使用，不影响反应性能。
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