简介：
热启动rTth DNA/RNA聚合酶经电子重构架技术，改变了Tth的活性配体中心，在经过优化的反应Buffer中，表现出卓越的RT-PCR特性，使其在Mg2+条件下仍然具有极强的逆转录活性。HotStart rTth DNA/RNA Polymerase在Mg2+条件下对于DNA模板和RNA模板扩增能力几乎无偏差，增加了其应用的拓展性，可在多种类型的实验中进行。在热启动的条件下，92℃加热5min后，可同步灭活病毒、变性杂蛋白、释放RNA核酸，再进行逆转录和后续的探针 RT-PCR扩增。这种特性允许在不进行核酸提取的情况下，直接加入粗制样本进行扩增。
应用范围：
（1）采用单酶进行一步法探针qRT-PCR
（2）在单管相同的Buffer系统中对RNA和DNA进行多重检测
（3）超多重的RNA模板扩增
（4）RNA的NGS建库
（5）高保真RT-PCR扩增等
热启动rTth DNA/RNA聚合酶的特性：
（1）依赖于DNA模板的聚合酶活性；
（2）极强的依赖于RNA模板的逆转录活性；
（3）5'-3'外切酶活性，用于探针切割；
（4）金属配体离子为Mg2+，通常使用浓度2~3.5mM；
（5）相比于Tth DNA聚合酶，rTth的耐热性能有所下降，92℃条件下的半衰期为30min；
（6）热启动rTth在50℃条件下100%无活性，92℃加热5min后恢复活性；
（7）以RNA为模板进行RT-PCR扩增的最大长度为280bp，扩增效率最高的长度为70-150bp。
操作方法
1.按以下组分配制20μl qRT-PCR反应液
HotStart rTth DNA/RNA Polymerase(5U/μl) | 0.2μl |
5×rTth Buffer(Mg2+ free) | 4μl |
100mM Mg2+ | 0.5μl |
dNTP Mixture(10mM each) | 0.2μl |
上游引物（10μM） | 0.4μl |
下游引物（10μM） | 0.4μl |
荧光探针（10μM） | 0.2μl |
RNA | Xμl |
ddH2O | Up to 20μl |
*注 (1)Mg2+通常使用2.5mM浓度，可在2-3.5mM调整。
(2)引物和探针的使用浓度可在0.1-0.8ul直接调整。
2．Direct One-Step qRT-PCR程序
Stage 1: 92℃ 5min 热启动
Stage 2: 60℃ 5min 逆转录
Stage 3: 92℃ 10s
60℃ 30s 35-45 cycles
*注rTth的最佳变性温度为92℃，其它温度条件都会导致试剂性能下降。逆转录步骤的温度可根据实际情况在58-72℃调整。
储存：
长期保存，请避光置于-20°C可保存3年。
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