Superbrilliant® LAMP扩增检测试剂盒（基于浊度指示）(ZS-M17002)

简介：

Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有很强的链置换活性，以及5’→3’的DNA聚合酶活性，因此可以应用于LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)检测实验。该制品内含Bst4.0 DNA聚合酶因此既可以扩增DNA，也可以直接扩增RNA分子。

LAMP是一种新型核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖与Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30~60分钟内DNA扩增可达10⁹~10¹⁰倍。

在LAMP的高效反应过程中会产生大量的焦磷酸根离子，其与镁离子结合形成焦磷酸镁白色沉淀，因此在实验过程中可通过检测反应液的浊度变化进行实时定量检测。也可在反应结束后肉眼直接观察焦磷酸镁沉淀，根据是否形成白色沉淀来判断反应是否发生。

储存：

LAMP Lyophilized Turbidity Reagent为干粉形式，包含Bst 4.0 DNA聚合酶、dNTP等，在未溶解前，该制品可-20℃长期保存，并可室温运输，性能无下降。LAMP Lyophilized Turbidity Reagent使用前每瓶用750μl的LAMP Turbidity Buffer溶解后，可立即使用，剩余试剂可在-20℃保存1个月，在-60℃以下长期保存。

 反应实例：

1. 按以下组分配置反应混合液

首次实验时LAMP Primer Mix分别采用1、1.5、2μl 进行预实验。

 2. 反应体系配好后，充分混匀并短暂离心，置于60~65°C进行反应（首次实验可采用60℃），连接LAMP实时浊度仪，对浊度变化进行实时检测。也可肉眼分别于20min、25min、30min、45min观察浊度变化。

LAMP实验的条件优化：

（1）LAMP Primer Mix配置

(2)四个参数对成功建立LAMP检测方法至关重要，分别是：引物位置；引物使用浓度；反应温度；反应时间。引物使用浓度、反应温度、反应时间是优先要确认的参数，如经过参数调整后仍不能达到检测用标准，则重新设计引物组合，再进行测试。

注意事项：

(1).为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作最好在不同区域中进行）。

(2).各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。

(3).实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸嘴。

(4).在LAMP反应结束后禁止将反应管盖打开，否则可能会导致气溶胶污染。一旦发生气溶胶污染，请使用本公司Superbrilliant® DNA气溶胶污染消除剂(ZS-M18005)进行环境清理。