简介：
Bst DNA聚合酶是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，具有很强的链置换活性，以及5’→3’的DNA聚合酶活性，因此可以应用于LAMP (Loop-mediated isothermal amplification)检测实验。LAMP是一种新型核酸扩增技术。采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖与Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30~60分钟内DNA扩增可达109~1010倍。该试剂盒配备变色反应指示剂，其含有羟基萘酚蓝（HNB）指示染料，阳性扩增样品的颜色由紫罗兰色变为天蓝色。
反应实例：
1. 按以下组分配置反应混合液
2×HNB LAMPMix | 12.5μl |
10×LAMP Primer Mix | 2.5 μl |
5M Betain | 0~4μl |
模.DNA | Xμl |
Bst2.0 DNA Polymerase | 1 μl |
ddH2O | Up to 25μl |
2. 反应体系配好后，充分混匀并短暂离心，置于60~68°C进行反应，分别于30min、45min、60min观察颜色变化。必要情况下85°C热失活5min（可选）。
LAMP实验的条件优化：
（1） 10×LAMP Primer Mix 配置
| 浓度 | 首次实验浓度 | 引物储液浓度 |
FIP | 8~16 μM | 8,12,16μM | 100μM |
BIP | 8~16 μM | 8,12,16μM | 100μM |
Loop F | 2~8μM | 2,4,8μM | 100μM |
Loop R | 2~8μM | 2,4,8μM | 100μM |
F3 | 0.5~2μM | 0.5,1,2μM | 100μM |
B3 | 0.5~2 μM | 0.5,1,2μM | 100μM |
（2）Betain使用浓度
测试浓度 | 5M Betain25μl体系添加量 |
0 M | 0 μl |
0.25 M | 1.25μl |
0.4 M | 2μl |
0.6 M | 3 μl |
0.8M | 4 μl |
（3）HNB LAMP对照设置
| 颜色对照 | 阴性对照 | 实验样品 |
ddH2O | √ | √ | √ |
HNB LAMP Mix | √ | √ | √ |
LAMP Primer Mix | √ | √ | √ |
5M Betain | 可选 | 可选 | 可选 |
模板DNA | √ | ╳ | √ |
Bst2.0 | ╳ | √ | √ |
（4）反应温度设置
通常反应温度为65°C，由于引物的效率差异，可在60、63、65、68°C进行适当调整。首次实验建议采用60、65°C。
注意事项：
(1). 为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作最好在不同区域中进行）。
(2).实验时，所需模板量取决与样品类型（0.1ng~100ng），可先进行预实验确定模板量。
(3). 各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。
(4). 实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸嘴。
储存：
-20℃可保存3年。
400-996-3155
