Supersmart 普通siRNA (ZS-SI1001)

简 介：

常规化学合成 siRNA 为 21-25nt 的双链小分子 RNA。即用型的 siRNA，已经经过纯化、退火等处理，只要用 DEPC 水溶解并配制成 20µM 液体即可直接转染细胞。 产品剂型为冻干粉，产品剂量经过严格测算，以摩尔数标明。

保存和使用：

转染方法（仅供参考）：

1. siRNA 的转染浓度：推荐的转染浓度是 50nM，可具体情况优化转染浓度，最佳转染浓度一般设置浓度梯度和时间曲线进行测试，建议优化的转染梯度为 100nM，50nM，20nM，10nM，5nM，1nM。

2. 使用RNAiMAX Transfection Reagent (Invitrogen)转染 siRNA 的步骤：

转染方法请参考转染试剂的使用说明，以下是使用 RNAiMAX Transfection Reagent (以下称 RNAiMAX) 转染的参考方法。

(1) 转染前一天，接种适当数量的细胞至细胞培养板中，使转染时的细胞密度能够达到30~50％(不同细胞生长速度不一样，因此，接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验)，请使用无抗生素的培养基。

注意：转染时，细胞密度是影响转染效率的关键因素之一，细胞生长过度会削弱细胞活力，从而降低细胞的转染效率。而细胞密度过低则可能达不到生长的要求，也会因此影响转染效率。

(2) 对于每个转染样品，按如下步骤准备 siRNA-RNAiMAX 混合液：

a. 稀释转染试剂 RNAiMAX：使用前，将 RNAiMAX 转染试剂轻轻摇匀，然后取适量，用不含血清的优化培养基(Opti-MEM I Reduced Serum Medium)稀释，轻轻混和，室温孵育 5min；

b. 稀释 siRNA：用 Opti-MEM I Reduced Serum Medium 稀释 siRNA，轻轻混和；

c. 稀释好的 RNAiMAX 经过 5min 的孵育后的孵育后，与上述(b)稀释好的siRNA 轻轻混和，室温培养 20min 以形成 siRNA-RNAiMAX 混和物，溶液可能会有浑浊，不过不会影响转染。

注意：稀释好的 RNAiMAX，如果长时间放置可能导致转染试剂活性的降低，应尽量在尽量在30min 之内之内与稀释好的 siRNA 混和。

(3) 将 siRNA-RNAiMAX 混合液加入含有细胞以及培养液的细胞培养板中，轻轻摇晃，使之混和；

(4) 将培养板置于 37 ℃的 CO₂ 培养箱中培养至检测时间(24~96h)。沉默效率的检测一般建议的时间为 24~72h。

保存：

产品以冻干粉的形式，常温运输，常温下一两周内稳定。收到产品后，请于-20℃至-80℃保存。

液体剂型： siRNA 的贮存浓度一般为 20µM，应避免反复冻融避免反复冻融(尽量不要超过 5 次)，建议溶解后的产品分装保存分装保存分装保存，-20℃~ -80℃保存半年以上。如果近期不做实验，产品需长期放置，最好以冻干粉形式保存。

冻干粉剂型： -20℃~-80℃保存一年以上。开盖前，请先稍稍离心，将粉末收集于管底，再用 DEPC 水，配制成 20µM 的液体剂型。

产品使用时，siRNA 最好冰上放置，使用完毕后，请于-20℃或-80℃小心保存;整个实验过程，要求无 RNA 酶环境，与产品接触的枪头、EP 管等都应该经过无酶处理；

特别提示：荧光标记 siRNA 要求避光要求避光。

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