Superbrilliant® miRNA反转录试剂盒（TaqMan法 适用于血清血浆样本) (ZS-M15003)

简介：

Superbrilliant^® miRNA反转录试剂盒（TaqMan法 适用于血清血浆样本)专用于血清血浆miRNAs分子的反转录试验（不可用于组织和细胞）。Superbrilliant^® miRNA反转录试剂盒（血清血浆样本)采用加A法进行反转录，加A法的反转录效率远高于茎环法，因此，采用该方法可极大的提高检测灵敏度（原理见图1）。该试剂盒操作简单，仅需要两步即可轻松完成miRNA的TaqMan法适用于cDNA合成，合成的cDNA可用于所有miRNA的后续定量检测。反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物进行PCR扩增，FAM标记TaqMan探针作为荧光报告基团进行定量检测（原理见图1）。

图1，Superbrilliant^TM TaqMan miRNA定量检测原理

用途：

Superbrilliant^® miRNA反转录试剂盒（TaqMan法 适用于血清血浆样本)转录获得的cDNA产物用于TaqMan定量PCR方法检测miRNAs分子（仅适用Superbrilliant^® TaqMan miRNA定量PCR预混液，货号：ZS-M15002，配合Superbrilliant^® TaqMan miRNA定量PCR探针使用，货号：ZS-MTXXXXX使用）。

操作方法：

1  按以下组分在0.2ml EP管中配制应液

2  在PCR仪上按以下条件进行加A反应:

3  反应完毕后，在上述12.5μl反应体系中加入如下试剂，并混合均匀。

4  在PCR仪上按以下条件进行反转录反应:

获得的cDNA产物可用于多个目标miRNA的检测。通常取2μl即可用于Superbrilliant^® TaqMan miRNA定量PCR预混液检测(货号：ZS-M15002，配合Superbrilliant^®TaqMan miRNA定量PCR探针使用，货号：ZS-MTXXXXX使用，该探针有一万余种，详细列表可查询Superbrilliant^® TaqMan miRNA qPCR kit.xls)。

5 利用Superbrilliant^® TaqMan miRNA定量PCR试剂盒对上述miRNA cDNA产物进行RealTime PCR检测

内参基因可选择使用：Superbrilliant^® TaqMan miR-16定量PCR试剂盒(适用于全血样本) (货号：ZS-MT01511)； Superbrilliant^® TaqMan miR-39定量PCR试剂盒(适用于全血样本)(货号：ZS-MT01513)。

（1）配制反应体系

按照如下组分配制20μl PCR反应体系：

（2）进行Real-Time PCR反应

通常采用两步法，程序如下：

（收集信号采用FAM染料通道）

反应结束后确认Real-Time PCR的cDNA样品和NTC阴性对照的扩增曲线(hsa-miR16)。

储存：请置于-20°C，可保存2年；避免反复冻融。 

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