简 介：
ZAPA3G DNA 聚合酶是一种新型的单酶体系，经基因工程改造和电子重构架，增加了DNA的亲和力，与其他高保真酶相比具有行业领先性。该酶具有 6kb/min 以上的扩增速度，扩增基因组或cDNA可达10kb，扩增质粒或噬菌体DNA可达20kb。ZAPA3G DNA 聚合酶具有高度的杂质耐受性、长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量，这些特点使得ZAPA3G 系列产品可用于粗制样品的直接扩增，无需核酸纯化步骤。该酶经化学修饰，采用专有的热启动技术确保 50℃以下 100%无活性，因此可在室温建立反应体系。热启动配方中，酶是结合在一个特定载体上，使其在第一部变性之前一直保持灭活状态，只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力，从而启动 PCR 扩增，这样就消除了反应设定和启动过程中非特异性启动导致的产物增加，提高 PCR 扩增的特异性、PCR 产物的产量、 准确性和精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围。中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
Multiplex PCR 又称多重 PCR，是指在同一 PCR 反应体系里加上两对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的 PCR 反应，已被广泛应用于科学研究和疾病诊断等多个领域，特别适用于微量样本的多位点检测。本制品使用ZAPA三代 DNA 聚合酶和优化的多重 PCR 反应缓冲液，使其可有效扩增 20 重以上的 PCR，具有极高的灵敏度，最大程度上减少了反应体系优化步骤。
特点和用途：
(1) 高杂质耐受性：该酶可耐受植物中的多糖多酚；全血、血清、血浆中的肝素、高浓度的血红蛋白、甘油三脂、乙醇、胍盐、SDS 等强 PCR 抑制剂。
(2) 完全封闭的热启动特性，50℃以下 100%无活性。
(3) 优化的反应缓冲体系，避免非特异性扩增。
(4) 高灵敏度，有效扩增 0.1ng 的人基因组 DNA（20重）。
使用方法
1. 按下表配制反应体系并混合均匀：
2×ZAPA3G Multiplex PCR Mix | 25 μl |
10×Primer Mix | 5 μl |
*模板 DNA | 0.1~200 ng |
ddH2O | up to 50 μl |
*模板 DNA：人的基因组200 ng，质粒200 pg，cDNA 1-10μl。
2. PCR 扩增循环参数
循环数 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95°C | 5 min |
30-35 Cycles | 95°C | 20 s |
57~60°C | 60 s |
72°C | 6 kb/min |
末延伸 | 72°C | 10 min |
请注意：该制品为热启动制品预变性步骤 5min 不可缩短，否则 DNA 聚合酶无法恢复活性。
3. 电泳：1kb 以内的扩增产物建议使用 3%~4% 琼脂糖凝胶，电压使用 80V，可以有效的分离各扩增片段。
4. 注意事项：
(1) 当模板 GC 含量>70%时，请添加 SupersmartTM 5×高GC含量模板、长片段辅助buffer（Cat. No.: ZS-M-1058）。
(2) 推荐引物设计原则：引物长度保持在 22 - 30 bp，扩增产物长度在 2kb 以下，GC 含量 50% - 60%，尽量减少各引物之间 TM 的差值。
(3) 检测单引物特异性：多重 PCR 反应前，应对设计的引物逐一扩增，以确定是否有非特异性扩增和扩增效率。
(4) 引物推荐浓度：推荐扩增片段300bp每条引物反应终浓度为 0.05-0.15μM，如某些目标片段产量偏低或偏高，适度调整其对应引物使用量以优化反应结果。
(5) 反应前需将引物制成 10×Primer Mix：
引物储存液 | 用量 | 10x 浓度 |
引物 1 F（100μM） | 1 μl | 1 μM |
引物 1 R（100μM） | 1 μl | 1 μM |
引物 2 F（100μM） | 0.5 μl | 0.5 μM |
引物 2 R（100μM） | 0.5 μl | 0.5 μM |
................... |
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引物 n F（100μM） | 3 μl | 3 μM |
引物 n R（100μM） | 3 μl | 3 μM |
ddH2O Upto | 100μl |
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常见问题及解答：
1. 扩增产物少或没有扩增。
(1) 降低退火温度（每个梯度降低 1℃）。
(2) 增加模板量。
(3) 增加 PCR 循环数。
(4) 增加退火时间为 90 sec，必要时可延长退火时间至 3 min。
(5) 增加引物使用量。
2. 存在非特异性扩增。
(1) 减少循环数，提高退火温度（每个梯度降低 1℃）。
(2) 减少引物使用量。
(3) 重新设计引物。
3. 电泳时条带模糊。
(1) 减少循环数(每次减少 3 个循环)。
(2) 减少起始模板量。
(3) 延长彻底延伸步骤时间至 15 - 30 min。
(4) 减少退火时间。
储存：
长期储存置于-20°C以下，可保存2年；短期使用置于 4°C，可保存3个月。
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