简 介：
ZAPA3G DNA 聚合酶是一种新型的单酶体系，经基因工程改造和电子重构架，增加了DNA的亲和力，与其他高保真酶相比具有行业领先性。ZAPA3G DNA 聚合酶具有 6kb/min 以上的扩增速度，具有高度的杂质耐受性、长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量，这些特点使得ZAPA三代系列产品可用于粗制样品的直接扩增，无需核酸纯化步骤。该酶经化学修饰，采用专有的热启动技术确保 50℃以下100%无活性，因此可在室温建立反应体系。热启动配方中，酶是结合在一个特定载体上，使其在第一部变性之前一直保持灭活状态，只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力，从而启动 PCR 扩增，这样就消除了反应设定和启动过程中非特异性启动导致的产物增加，提高 PCR 扩增的特异性、PCR 产物的产量、 准确性和精确性。该试剂盒独特的反应缓冲液，可在宽范围。中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
当执行高保真PCR时，在产生足够的产物用于克隆的前提下，减少循环数是很重要的。额外的循环数增加了产量却降低了保真性：反应早期少量的错配都是固定的，此后在每个连续循环中都得到放大，在随后的周期，任何额外的错误都将导致突变扩增的比例增加。该 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、5’-3’的外切酶活性、3’-5’的外切酶活性，产物部分带有”A“尾巴，部分为平末端，因此产物可用于 TA 克隆或平端克隆。该制品中已经含有溴酚蓝染料，PCR 扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶，无需再加入 DNA Loading Buffer。
特点和用途：
（1）高杂质耐受性：该 PCR Mix 可直接使用血液、蛋白含 量较高的动物组织材料进行PCR扩增，无需基因组提取。
（2）粗制样品的扩增能力：扩增能力>4kb。
（3）快速 PCR：该酶具有 6kb/min 以上的扩增速度，可显著的缩短 PCR 的扩增时间，在常规测试条件下，10s 的延伸时间可完成 1kb 的基因组 DNA 扩增。
（4）高 PCR 成功率：与其它类型的 PCR 扩增试剂对比中，ZAPA3G Universal PCR Mix 表现出最佳的 PCR 扩增成功率。
（5）高保真性能：该制品包含一定比例的 ZAPA High Fidelity 超保真 DNA 聚合酶，因此其具有一定的保真性能（挑菌落测试，其保真性能约为 Taq DNA 聚合酶的 60 倍）。
（6）热启动，防止非特异性扩增：ZAPA3G Universal PCR Mix 产品采用专有的热启动技术，确保 50 度以下完全无活性，仅有 95 度加热 5min 以后才能恢复其活性，因此可最大限度的提高扩增的特异性，减少非特异性产物的产生。
（7）高效的快速 DNA 释放剂：尽管该 PCR Mix 可以直接 使用组织细胞材料进行扩增，但我们仍然推荐采用 DNA 释 放剂进行样本的快速前处理（约需要 5min，可高通量操作）。 DNA 释放剂的前处理，使得制备的 DNA 模板可以进行多次、 多基因扩增，并长期保存 DNA，经 DNA 释放剂处理的样本，在室温条件下放置 1 个月，无任何后续影响，-20 可长期保存。
使用方法：
1. DNA 释放
（1）采用加热法：取 2-10 个毛发囊、1-10mg 动物组织等材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 μl 快速 DNA 释放剂A，于 PCR 仪中 98°C 加热 5min，加热完毕后加入 50 μl 快速 DNA 释放剂 B，混合均匀，即可使用。
（2）采用钢珠研磨法：取 1-10mg 动物组织等材料，放入到 2ml EP 管中，加入 250 μl 快速 DNA 释放剂 A 和 2-3 粒钢珠，研磨 1-2min 成浆体装。研磨完毕后加入 250 μl 快速DNA 释放剂 B，混合均匀，即可使用。
2. 按下表配制 PCR 反应体系并混合均匀：
2×ZAPA3G Universal PCR Mix | 25 μl |
上游引物(10 μM) | 2 μl |
下游引物(10 μM) | 2 μl |
步骤 1 制备的模板 DNA | 2 μl |
ddH2O | 19 μl |
3. PCR 扩增循环参数
循环数 | 温度 | 时间 |
1st Cycle | 95°C | 5 min |
25-40 Cycles | 95°C | 20 s |
50~60°C | 20 s |
72°C | 6 kb/min |
Last Cycle | 72°C | 2 min |
请注意：该制品为热启动制品预变性步骤 5min 不可缩短，否则 DNA 聚合酶无法恢复活性。
4. 电泳：1% 琼脂糖凝胶电泳，上样 5 μl，电泳结束在紫外灯下检测条带。
5. 注意事项：(1) 当模板 GC 含量>70%时，请添加Superbrilliant® 5×高GC含量模板、长片段辅助buffer（Cat. No.: ZS-M12012）。(2) 当扩增片段<1kb 时， 延伸时间可直接使用 15s；扩增片段1-2kb时,延伸时间使用 45s；扩增片段 2-3kb 时,延伸时间使用1min；当扩增片段>3kb时，请按照 2kb/min 的延伸时间进行设置。(3) 尽管该酶具有 6kb/min 的延伸速度，但按照 2kb/min 设置延伸时间的条件下，能获得最高的产量。(4) 当采用全血、血浆等 蛋白含量极高的样本时，扩增完毕后可能会有变性的蛋白沉淀，请离心后再进行点样和电泳。
储存：
长期储存置于-20°C以下，可保存2年；短期使用置于 4°C，可保存3个月。
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